高血压大鼠心肌细胞和成纤维细胞作用关系研究.pdfVIP

142 “心血管病研究新进展”专题讨论会 世界医学杂志 高血压大鼠心肌细胞与成纤维 细胞作用关系研究 陈天宝许昌声谢良地吴可贵 目的：研完自发性高血压大鼠心肌细胞(CM)和成纤维细胞(CFB)之间在体外培养时相互作用 的可能。 方法：放免法测定CM和CFB 24小时培养上清液AngIl含量，在CM和CF8中加入上述培养上清液， 并加用AngIlI型受体(ATI受体)拮抗荆一洛沙坦，观察细胞’H—TdR和1H·Leu掺八率变化情况． 生长，效应不能被洛沙坦所抑制。 结论：CFB可分糟耒明诞生长因子起旁分泌作用，CM未见有娄似作用． 关键词·‘肌细胞·心肌成纤维细胞心肌肥厚血管紧张素II细胞培养 搏动细胞比例占总细胞的95％以上， 心肌组织包括心肌细胞(cardiac魁SHR)CM和CFB荇自的培养j二 清液干预对方时对细胞分裂增殖能力 肌动蛋白单克隆抗体(福州迈新公 myocytes，CM)和间质细胞两部分， 其中心肌细胞占心脏总体积的75％． 的影响以探讨双方的相互作用可能。 司)免疫组化染色阳性细胞占95％以 而间质细胞仪占25％，但后者的细啦 上。CFB波形蛋自单克隆抗体(福州 数约为前者的2倍，其主要成分是成 材料和方法 迈新公司)免疫组化染色阳性细胞占 纤维细胞(cardiacfibroblasts，CFB)tl；o 90％以上。 CM和CFB各有自己不同的生长方式 乳鼠CM和CFB的培养和鉴定： CM、CFB培养上清液的制备： 和调控方式，彼此间独立进行，在心 出生1～2天SHR乳鼠(上海高血压 脏生理和病理生理过程中发挥着各自 研究所引种本所动物室(普通级)自 24孔培养板，48小时后吸弃培养基． DMEM冲洗两遍，换以不含血清的 的功能。但这两种细胞在体内是相互 行繁殖)40～50只，采用酶解法将 连接的，故又存在着相互作用、相互 左心室肌消化成单细胞悬液，经差速 DMEM孵肓12小时，再换以新鲜含 贴壁分离法分离出CM和CFB，应用 影响的可能。高血压左心室肥厚(1eft 时后分别收集上清液为CM的条件培 含20％小牛血清(FCS．杭州四季清 vennicularhypertrophy,LVH)的细胞学 公司)的DMEM(GIBCO公司)于 medium， 过程是CM肥大的同时伴发着CFB的 增殖和渐进性的心肌纤维化81，其发 5％CO。37。C培养箱(美国Reveo公 长至次汇合状态时再以类似CM方法 生发展过程中存在着这两种细胞相互 司)中培养。CM最初24小时培养时 作用、相互调控的可能’1。本研究利 加01mM5-2i脱氧尿苷(Brdu，G1BCO 用体外培养技术，通过考察新生自发 公司)以抑制非心肌细胞的生长，再 conditioned 于空白孔中24小时内含O．4％FCS的 用含20％FCS的DMEM培养24小时 性高血压大鼠(spontaneouslyhyperlensive 后进入实验。CFB