香烟刺激引起Nf+B激活加速小鼠肺癌增殖.pdfVIP

中华医学会第九次全国检验医学学术会议 暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编 书面交流 PU02-261 缺陷)转基因小鼠和LysMcre转基因小鼠(阴 乙型肝炎病毒X蛋白稳定表达株的构建及沉 性对照)。利用TEAGUE公司的TE-IO全自动 默效果观察 吸烟仪对小鼠进行香烟刺激。实验的具体方法 如下：将8—10周大的实验小鼠分6组每组数 杨兵，张莉萍，文阳安，黄世峰 量lO只，分别为C57BL6小鼠2组，NFkBp65 ‘10“n“X 2组，LysMcre2组。5x105 重庆医科大学附属第一医院检验科400016 LysMcre 的LLC细胞通过小鼠尾静脉注射入小鼠体内， 目的构建稳定表达乙型肝炎病毒X蛋白(HBX)7天后将每种小鼠的1组放入TE—lO全自动吸 基因的HepG2一HBX细胞株，观察小分子干扰烟仪内，每天呼吸Marlboro香烟烟雾3小时， RNA(SiRNA)对HBX基因的特异性抑制效果。仪器内香烟烟雾的平均总悬浮颗粒保持为 方法用脂质体将含有HBX序列的真核表达质 300±15mg／m3，7天后小鼠呼吸过滤后的空气 粒pCDNA3．1(+)／HBX—Flag转染入HepG2细做为休息，持续7天。每种小鼠的另一组则一 胞系，通过G418筛选后分别经RT—PCR和免疫直呼吸过滤后的空气。在整个实验的第21天 组化，对HBX的表达进行验证：化学合成靶向 将小鼠杀掉，取出标本进行检测。通过形态学， HBX的siRNA(即siHBX)，转染入HBX稳定表组织化学分析肿瘤的变化，免疫印迹分析肿瘤 的增殖，Real—timePCR和ELASA分析炎症细 达株，分别以RT-PCR和实时荧光定量RT—PCR 胞因子的释放。 检测HBXWesternBlot检测HBX蛋白表达水平 以验证siHBX对HBX基因的沉默效应，流式细结果与空气对照组相比，吸烟组C57BL6小 胞仪检测细胞周期变化。 鼠和LysMcre转基因小鼠肺表面上的肿瘤数 目显著增多，(分别为，62±9比112±13和 结果成功构建表达HBX基因的HepG2一HBX细 45±8比78±10，pO．05)。肺的重量也明显 胞株；siHBX可以高效特异抑制HBX表达，并 抑制细胞周期进展。 结论siHBX可作为一种靶向抑制肝癌细胞株 n“^h 内HBX表达的策略，为后续HBV感染相关性肝p65 x LysMcre吸烟组肺肿瘤数目和肺 癌的治疗奠定了实验基础。mRNA表达水平， 重上与不吸烟组相比并无明显差别(32±6比 在吸烟组中，NFkBp65“…““xLysMcre小 PU02-262 鼠肺肿瘤数目和肺重均比LysMcre小鼠低。 香烟刺激引起Nf B的激活加速小鼠肺癌增 殖 转基因小鼠肺的PCNA，Bcl—XL，Bcl一2蛋白的 李冬，万海英 表达和IL一6，IL-8，TNFa以及炎性细胞的数 上海市同济医院检验科200065 量均比空气对照组明显增高，但NFkBp65 n“川101