猪链球菌2型PAI4和vapE基因缺失突变菌株的构建.pdfVIP

第三届猪病防控学术研讨会会议论文集 2．2 SLY蛋白的抗原表位的鉴定 用ELISA检测所选多肽对靶蛋白的结合，挑取15个噬菌斑克隆，提取基因组进行测序，结果 显示，有12个噬菌斑克隆噬菌体基因组序列完全一致，参照文库的精简遗传密码表，翻译成蛋白质 序列，通过与溶血素蚩白的系列进行比对。发现在溶血素蛋白453．459位置上有较为相似的序列 、肌卜WD，此区域位于溶血素蛋白的C端。从溶血素蛋白的三维结构图可以看出在453-457之间形 成的是一个p折叠，13折叠为凸出结构，多出现在蛋白质抗原表面．利于与抗体嵌合。在458是线 性结构459形成的是个环状结构。 2．3缺失SLY抗原表位氨基酸序列后的活性鉴定 溶血试验结果显示缺失任一氨基酸的蛋白都不再具有溶解红细胞的能力，Westernblot试验结果 显示缺失抗原表位氮基酸的蛋白不能被SLY的单抗1All所识别，伊能被SLY的多抗识别，即这些缺 失蛋白还具有良好的反应原性。 参考文献(略)～ 猪链球菌2型PAl4及vapE基因缺失突变菌株的构建 齐狲1，贝为成2刘军1，祝令伟1，孙洋1，尹铁勇1，纪雪19冯书章1‘ (1．军事医学科学院军事兽医研究所，吉林长春，130062；2．华中农业大学，武汉430070) 摘要为了研究猪链球菌2型基因组中毒力相关蛋白E(vapE)基因和基因岛4(P舢4)在细菌致病性中的作用， 利用DNA同源重组的原理，通过温敏型自杀·}生重组质粒，以SS2中国流行强毒株458#为研究对象，定点敲除SS2 PAl4缺失株(458#△PAl4)． 基因组中vapE和PAl4基因片段，分别构建了SS2VapE缺失株(458#△vapE)和SS2 vapE和PAl4在猪链球菌2型致病中的作用奠定了基础． 关键词猪链球菌2型；毒力相关蛋白E；基因岛 suis 2，ss2)是一种重要的人兽共患病原菌，对人和动物均 猪链球菌2型(Streptococcusserotype 具有较强的致病性。猪链球菌2型主要引起猪的脑膜炎、关节炎、败血症、心内膜炎、脑炎、流产、 多浆膜炎、支气管肺炎和猪的猝死等。并且可致人的脑膜炎、心内膜炎、败血症和永久性耳聋，严 重的可导致人的死亡。 至今为止，已有3株猪链球菌2型强毒株的基因组序列已发表，但是其中仍旧有许多功能未知 或假定基因，有待于进一步的研究。本实验室通过消减杂交技术分析出毒力相关蛋白E(vapE)基 因存在于SS2强毒株中而不存在于SS2无毒株中。其产物VapE属于毒力相关蛋白家族。对于毒力 相关蛋白家族的研究表明，毒力相关蛋白A和D的致病作用比较明显，但对于VapE的研究尚未见 报道，对其在猪链球菌感染与免疫中的作用有待于进一步研究。 此外，我们通过对猪链球菌2型基因岛的分析发现，无毒株1330#相对于强毒株在基因组上存 210个碱基，这一 在一段长约1lkb的缺失，在05ZYH33中的相对位置从第834907个碱基至第846 缺失片段两端含有10bp的重复序列，共有11个开放阅读框，两侧含有与基因转移相关的重组酶， GC含量为34．2％，而整个基因组GC含量为41．11％，推测该基冈群可能为一个致病岛(PAl4)。 为了迸一步研究vapE和PAl4的功能，本研究利拟用自杀性质粒和同源重组技术点敲除强毒株 458#基因组中这两个片段，米分析敲除前后菌株致病性的差异，为进一步研究vapE和PAl4的功能 奠定基础。 1材料与方法 ’国家973项目资助(2006CB504402) 通迅作者：冯书章，Email：shuzhangf@yahoo．com 635 细菌病 1．1菌株和质粒 猪链球菌2型强毒株458#分离自四川病猪体内，由本室保存。用于同源重组的温度敏感型自杀 性质粒是pSET4s，由华中农业大学国家微生物重点实验室贝为成老师惠赠， 1．2 引物 根据GenBank中发表的05ZYH33基因组中的对应序列合成引物如表l所示。