宿主细胞内SARS-CoVN蛋白相互作用蛋白的筛选与鉴定.pdfVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2008, 35(9): 1007~1013 主细胞内SARS CoV N 蛋白相互作用 蛋白的筛选与鉴定* 1) 2) 2) 1,3)** 常维山 翟 静 宋文刚 刘永庆 1) 2) ( 山东农业大学动物科技学院，泰安271018；泰 医学院基础医学部，泰安271000； 3) S7N 5E3, Canada) Medical College Univ ers ity of Saskachewan, Saskatoon 摘要 SARS-CoV N 蛋白可与病毒RNA 形成复合物，也可与病毒或宿主细胞中多种蛋白质相互作用，影响宿主细胞的多个 信号转导通路，干扰宿主细胞的细胞周期，从而改变宿主细胞的生命活动 利用酵母双杂交技术筛选了 15 个宿主细胞内与 SARS-CoV N 蛋白的相互作用蛋白，其中包括信号传导组分7 种，蛋白激酶3 种，细胞因子2 种，未知功能蛋白3 种 并利 用免疫共沉淀方法进一步证实了趋化因子CXCL16 是宿主细胞与SARS-CoV 核衣壳蛋白的相互作用蛋白 关键词 冠状病毒，宿主细胞，SARS-CoV N 蛋白，相互作用蛋白，CXCL16 学科分类号 Q93 SARS 冠状病毒(SARS-CoV) 属于冠状病毒属 组和蛋白质组的角度和已有细胞信号传导的知识来 的一个新种，是严重急性呼吸系统综合症(SARS) 看，这些已知蛋白质仅是宿主细胞与SARS-CoV N [8] 的病原体，它的出现为我们深入研究冠状病毒的分 相互作用蛋白的一部分 Brunn 等 在研究SARS 子生物学特性及其与宿主的相互关系提供了宝贵的 病毒和宿主细胞相互作用的过程中发现，SARS 病 资料. SARS-CoV 基因组为一条约30 000 nt 的正链 毒不同成分之间以及病毒和宿主细胞之间的相互作 RNA 分子，由十余个重叠的开放阅读框架(ORF)和 用是一个复杂的网络 因此通过先进的技术筛选宿 两侧的非编码区组成 病毒编码的结构蛋白包括核 主细胞内与SARS-CoV N 蛋白的相互作用蛋白， 衣壳蛋白(nucleocapsid, N) ，包膜蛋白(envelope, E) ， 对于揭示SARS 冠状病毒的致病机理、探寻新的药 膜蛋白(membrane, M) ，表面糖蛋白(spike, S)4 种 物靶标具有非常重要的意义 鉴于此，我们利用酵 其中N 蛋白在病毒复制中发挥 重要作用 研究 母双杂交方 对宿主细胞内 SARS-CoV N 蛋白的 表明，N 蛋白主要分布于细胞质，也可分布于核 相互作用蛋白进行了筛选，共筛选到15 种新的相 内 N 蛋白主要参与 SARS-CoV 核衣壳的形成、 互作用蛋白 在此基础上进一步利用免疫共沉淀方 基因组RNA 合成调控、亚基因组RNA 转录和翻 确定了CXCL16 确实是宿主细胞SARS-CoV 核 译，还通过破坏细胞分裂抑制宿主细胞增殖或延缓 衣壳蛋白的相互作用蛋白，现将研究结果报告 细胞生长，N 蛋白能与病毒或宿主细胞中多种蛋白 如下 质相互作用，影响宿主细胞的多个信号转导通路、 干扰宿主细胞的细胞周期、改变宿主细胞的生命活 动 细胞内已发现的SARS-CoV N 蛋白结合蛋白 * 山东省科技攻关项目(2006GG22020 15)和山东省自然科学基金 包括hnRNPA1 、14-3-3 蛋白、cyclin-CDK 复合物、 资助项目(Y2005C21). 泛素相 关小修饰