磁珠富集法分离沙拐枣Calligonum+mongolicum+微卫星DNA.pdfVIP

草业科技创新与草业发展 磁珠富集法分离沙拐枣CaHigonulllmongolicum微卫星DNA 张茜1， 王春梅，张怀山，乔国华，苗小林 (中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所甘肃兰州730050) Turz．)为多年乍灌木类典型的旱生荒漠牧草植物，是干旱半 攮要l沙拐枣(Calligonummongolicum 于旱荒漠区系的一个较蕈要的建群种和防风I盎I沙，绿化戈蹙的优良种，嫩枝具有药用、饲用等多种经济价 beadsenrichmentmethod)对沙 值．本研究采用能高效的分离动植物的微卫星位点的磁珠富集法(Magneitic 拐枣进干，微LJ星DNA的捕获分离．得到19处多态性能点，成功开发出5对SSR引物．这将被更有效的用 于该物种的遗传多样性和保护研究。 关键词I沙拐枣：磁珠富集法；微卫星标记；遗传多样性 沙拐枣(Calligonummongolicum L．) 植物，为多年生灌木类典型的旱生荒漠牧草植物…，是干旱半干旱荒漠区系的一个较重要的 建群种和防风I占I沙、绿化戈壁的优良种‘2’。其嫩枝还具有药用、饲用等多种经济价值川H1， 是荒漠地区良好的薪柴，长期被当地农牧民采集，野牛资源短缺。如能对遗传多样性高、牛 存能力强的种及其牛境加强保护，进行引种规模化种植，对解决十旱荒漠区的薪柴、饲用： 减少天然植被破坏和环境保护等都有重要意义。 由于微卫星DNA)午段存不同的基因组中自．很大的变异，具有种族特异性嗍。不会象 RAPD标记那样的通用引物可以使用，因此，在做遗传多样作和遗传结构等方_值f的研究中， 不同的物种需要有它们各自的特异性SSR引物进行PCR检测。对于大豆、玉米、水稻、土豆： 高檠【6】【71等已经有研究公开报道TSSR弓I物的物种，可以直接进行群体遗传结构分析、遗传 连锁图谱、分子标记辅助育种、遗传进化和品种箍定以及遗传多样性和保护遗传学等SSR分 子标记研究。但由于亲缘关系较近的物种其微卫星两侧的引物绑定位点并不完全保守【8】【9l， 虽可以对同科／属的不同种问将以发表(主要见期刊MolecularNotes和Conservational Ecology Genetics)的微卫星引物转移试用，不一定能找剑合适的，且还需要进行克隆测序的引物验 证．凶此，对于大多数至今仍没有或仅有较少SSR3I物报道的物种，必须在知道其有重复的 微卫星位点的DNA核苷酸序列的前提下，设汁出特异性SSR弓I物，继而进行SSR分予标记方 面的研究。 beads enrichmentmethod)【lo】进行沙拐枣c． 本研究采用最新的磁珠富集法(Magneitic mongolicum微卫星位点的分离。该方法综合了之前的许多研究方法，提炼了Hamilton等 (1999)tit]描述的杂交捕获法，已被广泛用于动植物及微生物的研究中。本实验所用的方 法最突出的特点是在SuperSNX上连接了一个Grrr接头，能确保阳性克隆的PCR产物效 率更高，而且该接头的PCR产物能得到较小的PCR产物，这些小片段与生物素标记的微卫 星探针(一段短核苷酸片段)结合，随后进行磁珠富集，磁珠表面的链亲和素(Streptavidin) 与结合上探针的微卫星片段共价结合，再洗脱，此方法分离出的含有微卫星位点(SSR)的 基金项目：中央级中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目：旱生牧草沙拐枣优质种源的分子 选育和引种驯化(BRFl00201)：国家自然基金 1 12050 作者简介：张茜(1980-)，女，汉，博士；E-mail：兰坦驻gi垫iZ酸鲤i鱼§：￡QgT￡：1：093I-2 193 草业科技创新与草业发展 DNA片段较小，可以直接高效的克隆得到目的片段。 l材料和方法 I．I总DNA提取