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342 中周癌症研究进晨。
运用RNA原位核酸杂交检测乳腺癌组织中
ER
mRNA、PRmRNA中的应用
陆良勇黄伟达刘尚廉扬广才陈成伟李晓燕蒋树娟魏英
RNA原位核酸杂交(耐qAnucleicadd in
hybfidizadon
苷酸等探针，按碱基配对原则，检测细胞和组织内RNA表达的一种原位杂交技术“’zJ。近年
来。随着制备非同位素标记探针的进步，RISH已成为最有效的分子病理学技术之一。人们在
对人雌激素受体(estrogenreceptor，ER)、孕激素受体(progesteronereceptor，PR)的基因结构和
J。为据索乳腺癌组织中ER
功能已有了充分认识[3,4】，并用核酸杂交技术检测其基因表达L51
做RISH和免疫组化(immunohistochemistry，珊C)对照检测，现报告如下。
聩敝s贵法
(一}一般材料
月闻外检标本。按RISH杂交前处理的要求uoJ，对切取组织的刃具、存放组织及组织脱水所
cnl×0．8
洗，防止RNA酶的污染。并将乳腺癌组织立即切成小于1．0 em×0．2锄组织块，分
别做4％多聚甲醛(用新鲜0．05mol／LpH7．4豫S配制)固定和液氮内储存，防止RNA迅速
降解。固定时间为24h，石蜡切片厚度为5脚，用无RNA酶的防切片脱落的载玻片贴附组织
切片。HE切片按刘复生组织学计分分级标准傲乳腺癌组织学分级，属I级、Ⅱ级和Ⅲ级者，
分别为93，98和87例。
(二}RISH流程
1．杂交前处理切片经脱蜡去二甲苯逐缀酒精至ddH20，2×SSC5
20 min，0．25％醋酸酐10rain，经70℃2×SSC
rain，5／ag／rnl蛋白酶K置37℃湿盒内孵育20
漂洗、40℃2×SSC各漂洗15min，2×SSC3min，切片再经75％～100％酒精梯度脱水。
CAGCTCGTT(Y2C
cDNA序列(5-CTC
2．探钟的刺备和标记按Walter等13，loJ的ER
TTGGAT-3’)和gastne。r等14’的PR
391
在美国PE公司鲍BI
M{mnheim公司3-Digoxigenin-VN标记试剂盒标记。
作者单位：200233上海，解放军85医院病理科倩京军区肝病研究中心分子病理室(陆趋募杨广才陈成
伟李晓燕)；上海医科大学肿瘤医院病理科(刘尚靡)；复旦大学生命科学院生化系(黄伟达)；上海市黄浦区
中心医院病理科(蒋树娟魏荚)
运用RNA原位棱酸杂交检涮乳腺癌组织中职mRNA、PRmRNA中的应用 343
x
3．预杂交每张切片滴加40m预杂交液[3×SsC，1
葡聚糖，125
gg／ml酵母tRNA，10t,g／rnl变性和剪切的硅鱼精子DNA．10gg／mlPolyadenyl—
eytidyic h。
acid，50％甲酰胺，20mmol／L焦磷酸钠pH7．2]，置37℃湿盒内孵育2
4，杂交抖去并甩干杂交溶液，用DAKO魔笔沿组织周围划圈，每张切片滴加30正探针
杂交液(内含20 h。
SSC漂洗2×15min。均傲振荡漂洗切片。
6．杂交后显色if)BufferAmol／L弼s，1
pH
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