细胞生物学15课件.pptVIP

C. elegans雄虫有1031个体细胞、约1000个生殖细胞。 神经系统由302个细胞组成，来自于407个前体细胞，105个细胞发生了PCD。 控制线虫PCD的基因有：Ced-3、Ced-4和Ced-9。 Ced-3和 Ced-4诱发凋亡； Ced-9抑制Ced-3、Ced-4的作用。 2002年10月7日英国人Sydney 、美国人Horvitz和英国人Sulston ，因在PCD方面的研究获诺贝尔诺贝尔生理与医学奖。 H. Robert Horvitz John E. Sulston Sydney Brenner 二、细胞凋亡的生理和病理学意义 （一）生理学意义 1. 生长发育：组织与器官的塑造（趾的分化）；动物变态；皮肤角质形成； 2. 免疫细胞分化：克隆选择； 3. 防御：清除衰老细胞、DNA损伤的细胞、和被病原体感染的细胞。 Sculpting the digits in the developing mouse paw by apoptosis（Wood 2000） （二）病理学意义 1. 病原体侵染； 诱导凋亡——HIV 抑制凋亡——Poxvirus 2. 细胞凋亡不足 肿瘤，自身免疫疾病； 3. 细胞凋亡过度 神经退行性疾病（AD，帕金森症）、心肌梗塞、 再生障碍性贫血、骨组织坏死。 三、细胞凋亡的检测方法 1. 形态学，电镜，光镜； 2. DNA凝胶电泳——ladder； 3. 流式细胞计； 4. 核酸内切酶活力检测； 5. 免疫学方法； 6. Annexin V检测细胞膜外表面PS； 7. TUNEL技术。 8. 常用检测细胞凋亡的染料： 二乙酸荧光素（FDA），绿色荧光，活细胞染色。 Hoechst 33342或33258，DAPI，吖啶橙（AO），半通透，凋亡和固定后的细胞荧光较强。 溴化乙啶（EB）、碘化丙啶（PI）、放线菌素D（7-AAD），不通透，正常和凋亡细胞拒染。 可用不同性质的染料对凋亡细胞进行双染色。 Human embryo at day 4 morula containing 23 nuclei labelled with DAPI (blue), including seven TUNEL-labelled condensed nuclei (pink, arrow) that were excluded from development (Kate Hardy 1999). 第三节 细胞凋亡的分子机理 一、凋亡相关的基因和蛋白 与细胞增殖有关的原癌基因和抑癌基都参于对细胞凋亡的凋控。 研究较多的有ICE、Apaf-1、Bcl-2、Fas/APO-1、c-myc、p53、ATM等 。 1．Caspase家族 相当于线虫的ced-3，是引起凋亡的关键酶。特点： ①酶活性依赖于cys残基的亲核性； ②总是在asp之后切断底物，故名caspase（cysteine aspartate-specific protease）。 ③亚基由同一基因编码，前体被切割后产生两个活性亚基，组成的异四聚体。 Caspase classification（Zimmermann 2001） Executioner or effector Autocatalytic initiator 2．Apaf-1 凋亡酶激活因子-1（apoptotic protease activating factor-1），线虫的同源物为ced-4。 作用：参与线粒体凋亡途径，该基因敲除后，小鼠神经细胞过多，脑畸形发育。 Apaf-1与cyt c、ATP/dATP结合后，召集caspase-9，形成凋亡体（apoptosome），激活caspase-3，启动caspase级联反应。 3. bcl-2基因家族 含有1-4个Bcl-2同源结构域（BH1-4）。分两类：抗凋亡基因，如：Bcl-2；促凋亡基因，如：Bax。 促凋亡蛋白能引起线粒体外膜通透性改变，导致cyt c释放，引起凋亡。 bcl-2相当于线虫的ced9。主要定位于线粒体膜、也存在于ER和外核膜，拮抗促凋亡蛋白的功能。 Bcl-2 gene family（Zimmermann 2001） 4. Fas fas又称作APO-1，属TNF受体家族。 1993年人白细胞分型国际会议统一命名为CD95。 fas基因编码产物为分子量45KD的跨膜蛋白。 Fas蛋白与Fas配体组成Fas系统，二者的结合激活caspase。 5．P53 基因组的守护者。辐射诱导的DNA损伤可通过ATM激活p53，阻断细胞周期，并提高Fas的表达，诱导凋亡。 6．Myc 转录因子，生长因子存在，Bcl-2基因表达时，促进细胞增殖，反之引起细胞凋亡。 7. ATM 是DNA损伤检验的重