SV-tk基因-放射治疗抗肿瘤动物实验探究.pdfVIP

● 中华预防医学会放射卫生专业委员会第四届全国学术会议大会报告 Nations．SourcesandEffectsof Radiation．UnitedNationsScientificCommitteeon 131】United Ionizing Atomic theEffectsof totheGeneral scientificannexes．Volume Radiation，2000Report Assembly,with Nationssales E．00．IX．3．United l：Sources，Unitedpublication Nations，NewYork，2000． SV—tk基因一放射治疗抗肿瘤动物实验研究7 杨业鹏陈治国周梅沈嵌剑沈磊李五岭 北京大学基础医学院放射医学教研室北京，100083 放射治疗是临床治疗恶性肿瘤的重要手段之·。但由于放疗同时造成正常组织损伤以及肿瘤 细胞存在辐射抗性等问题的困扰，其疗效尚不尽人意。肿瘤基因治疗是医学重大进步的表现，并 已取得了一些令人振奋的成果，但在其临床应用之前仍有许多问题需要解决。近年来将放射治疗 与基因治疗相结合，以发挥其优势～增强疗效，弥补其缺陷一降低副作用，成为肿瘤治疗研 究的重要发展方向。 为研究整体条件下Y射线与HSV—tk／GCV基因治疗系统联合应用对肿瘤的治疗作用，我们利用 阳离子脂质体介导瘤内注射法将HSV-tk基因导入荷瘤小鼠的瘤体内，腹腔注射GCV合并局部移植瘤 y射线照射，观察了两因素单独及联合治疗对荷瘤小鼠局部肿瘤生长变化和肺转移瘤结节形成的 影响，并就联合治疗对抗肿瘤免疫反应的影响进行了进一步的探讨。 1材料和方法 照质粒，均具有潮霉素B抗性，由本校生物化学与分子生物学系惠赠。 肺癌细胞建立局部移植瘤模型，随机分6组每组16只，每组各取6只小鼠在皮下注射的当天尾静 脉注射1×101LewiS肺癌细胞建立肺转移瘤模型；组别：．①无治疗组；②空载体组；⑨射线治疗 组：；④基因治疗组；⑤联合治疗组联合治疗组分两个弧组：组I—GCV(5mg／kg)；GCV(20mg／kg)。 u1 2000 1．3荷瘤小鼠基因转染、GCV腹腔注射和照射处理：取10LipofectamineTM u u u (Invitrogen公司)溶于40l生理盐水中，取10g质粒DNA溶于401生理盐水中，将两种 la 液体混合均匀室温静置45分钟；使用4号针头瘤内多点注射1001脂质体和质粒DNA混合物。 1．4治疗程序：肿瘤体积约绿豆大时作基因转染，转染后24h腹腔注射GCV。美12h一次， 连续6天。第一次GCV处理后12h，作一次性肿瘤局部照射。 转染肿瘤组织的总RNA，经DNA酶处理后进行逆转录及PcR反应。 1．6局部荷瘤小鼠肿瘤直径的测量和体积计算：使用游标卡尺测量右后肢局部肿瘤的长短径， 每3天测量一次，按照下列公式计算肿瘤体积：肿瘤体积=(aXb2)／2，a为长径，b为短径。 1．7局部荷瘤小鼠生存期的观测：从小鼠右后肢局部肿瘤接种的当日(当日计为0天)开始 计算，至小鼠死亡为止，以天数为单位 1．8肺转移结：肖的计数：右后肢局部接种和尾静脉注射LewiS肺癌细胞后2周，处死小鼠， 解剖取肺用Bouin’sSolution同定液中固定48小时，计数肺表面肉眼可见的转移结节数目。 1．9局部移植和肺转移荷瘤小鼠外周血CD4+和CD8+T淋巴细胞亚型分析：内眦静脉取血免 公司)检测 ’ ‘ 中华预防医学会放射卫生专业委员会第四届全阑学术会议鼹放射卫生专业委员会换届大会论文集 l。10处死小鼠