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青霉素-87菌种的优化选育 发表人：王 茹 华北制药股份有限公司 102车间菌种QC小组 2006年6月? 概述 2005年，我车间在青霉素-87菌种的生产中取得了巨大成绩，胜利地完成了股份公司下达的攻关任务，成本最低降至39元/十亿，而且在多项技术指标中已经赶超国内同行业其它厂家。菌种是抗生素生产的基础，其优劣决定着生产水平的高低，而菌种的优良特性只有通过不断的优化选育才能稳定在一个高水平。本课题围绕着优化选育青霉素菌种展开。 我车间青霉素的发酵水平与同行业 其他厂家相比还有很大差距。 车间方针目标：优化选育新菌种 力争产率1:1.6 * * 河北省第二十七次QC小组 代表会议交流材料 小组简介 注册 编号 —— 2005. 7 课题 类型 —— 攻关型 小组 人数 —— 11人 TQM 教育 —— 52h/人 活动 周期 —— 2005.1-2005.12 活动 次数 —— 13次 出勤 率 —— 98% 一 ? 小组概况 表1. 小组成员一览表 实验进度安排 高工 34 张 弘 10 实验数据整理 助工 26 张小双 9 工作实施 技师 34 张 伟 6 工艺指导 主任高工 40 祁桂玲 11 工作实施 中技 30 王 茹 8 工作数据统计 技师 36 饶阳宾 7 工作实施 技师 33 付 娟 5 工作实施 技师 45 王世雯 4 工作实施 技师 48 付应艳 3 工作实施整理 技师 44 康自力 2 QC组长 工程师 32 王 群 1 组内分工 职称 年龄 姓 名 序号 小组 成员 菌种优化选育工艺流程图 砂土孢子 双碟菌落 斜面孢子 摇瓶接种 摇瓶培养 菌种验证 二 ?发表对象简介 理由一 理由二 根据上述理由，本小组确定以青霉素-87菌种的优化选育为本次活动的课题。 三 ? 选题理由 图1 .我车间与其他厂家发酵单位对比图 调查 结果 2005年我车间开始使用-87菌种，生产水平稳步提高，1-6月份平均发酵单位59971u/ml，但与国内其他厂家相比，还存在不小差距。 平均单位:59971 平均单位:62959 调查1．2005年上半年车间月平均发酵单位情况 四 ? 现状调查 调查 结果 青霉素-87菌种的孢子形态杂，弱孢子比例偏多，而且菌落的放射线纹发散，说明菌种高产基因并没有得到充分体现.因此要想完成车间的攻关目标，就必须对青霉素-87菌种进行优化选育。 图2. 孢子镜检形态 图3. 菌落形态 调查2．孢子显微镜和菌落形态观察 2% 五 ? 制定目标 目标值确定依据： 在保证产品质量和收率的前提下，青霉素生产菌种发酵水平必须较原菌种提高2%以上，方可鉴定升级为新菌种。 《菌种控制程序》 HY/QP 09·01-2000 新菌种标准 华北制药股份 有限公司 目标可行性分析 菌种优化选育是一项周期长、难度大、成功率低的工作。尽管车间在菌种选育工作投入较多，自2002年以来一直没有选育出新菌种。 1.菌种通过自发突变和诱发突变，其基因将产生可稳定遗 传的变异。再通过菌种筛选和菌种优化，选育到高单位突变菌株是可行的。 2.从车间生产实际来看，组织了多次技术攻关。生产菌种优化选育后，发酵单位同比都有2%以上的提高。 3.小组成员由车间主任、工艺员、种子组组长及技术员 、技师等组成，专业技术素质高，选种经验丰富，管理到位，责任心强。 挑战性 可行性 为了提高优化选育效率，我们小组成员对影响优化选育的因素进行了认真的分析和讨论，绘制出因果分析系统图。 优化选育效率低 选育效率低 优化效率低 出发菌株不纯 诱变对象不适 诱变方法选择不适 摇瓶筛选周期不适 培养基成分不适 操作误差大 样品检测精度不高 筛选工艺不适 六 ? 原因分析 针对系统图的7条末端因素，小组成员逐项进行了验证。 验证一：出发菌种不纯 我们对04~05年度所用过的出发菌种进行了纯度试验，结果显示所用过的出发菌种的纯度均高于95%。 表2 菌种纯度试验表 97.4% 97.7% 97.8% 96.9% 98.6% 98.3% 纯度 87-44-117 87-40-36 87-35-12 87-32-34 87-26-86 87-21-10 菌种号 验证人：王群 付应艳 结论：不是要因。 七 ? 确定要因 验证二：诱变方法选择不适 我们对04~05年度所做过的诱变育种结果统计分析，-87谱系菌种的选育随着三种诱变方法使用次数的增加，致死率也随着下降，说明三种诱变方法对-87谱系菌种具有了一定的饱和效应，造成诱变效果的降低。 表3 致死率统计表 96.52%