加强结核病实验室诊断和耐药性检测新技术研究和应用.pdfVIP

苴昼主国监盔鸳生堑堂苤金f主逵金丛2鳖《堕堂垒耋拯滏丝生堑鲎墨丝壅生迨堑 lIiI强结核病实验室诊断和I耐药性检测新技术的 研究和应用 胡忠义 同济大学附属上海市肺科医院，上海市结核重点实验室 结核病实验室珍断和耐药性检测技术研究一直是国内外同道关注的焦点内容…。但是 现行的结核病细菌学涂片检查敏感性低，常规培养需时4--8周，快速仪器培养法也需2～ 6周，远不能满足临床快速诊断的需求。血清学和分子生物学诊断技术尽管有较高的敏感 性和特异性，但其在结核病诊断中的临床应用还存在问题。结核分枝杆菌(MTB)常规耐 药性测定需时4周，快速培养仪检测法也需5--一7d，而且目前开展的MTB耐药性测定通常 仅检测4个一线药物，根本不能满足临床治疗的需要。因此，快速、灵敏的结核病实验室 诊断和耐药性检测新技术研究及其应用迫在眉急。近年来，国外一些高水平杂志相继发表 了一些新技术在结核病诊断和耐药性检测中的应用文章，备受国内外学者关注。值得在国 内开展研究和应用。 observation 1．显微镜观察药敏试验法(Microscopicdrug 该技术是一种痰标本液体培养结合显微镜观察技术。依据MTB在液体培养基中生长时 形成索状结构，采用倒置显微镜观察索状结构可用于MTB的快速珍断。由于液体培养基营 养丰富，因此MTB生长迅速，可显著缩短培养时间，而且提高培养阳性率。如在液体培养 基中加入抗结核药物，并以不含药物管为对照，即可同步进行痰标本的直接药敏试验。检 显著性(P0．01)。该法直接检测肺结核患者痰标本对利福平、异烟肼、乙胺丁醇和链霉素 dr2]。上述结果提示， 验时间平均为7d，而快速培养仪和常规药敏试验平均需时22d和68 MODS是一种快迷、枞，时、IuJ世的结核病实验室诊断和耐药性测定新技术。 assay，ELISPOT) 2．酶联免疫斑点技术(Enzyme—linkedimmunospot 该技术原理是结核患者体内存在特异性致敏T细胞，当再次受到结核抗原刺激后，会 产生Y干扰素、白介素等细胞因子，检测致敏T细胞产生的细胞因子有助于结核病的快速诊 董鱼主国鳖鏖丝垒堑堂盘金l室逵金丛2壁《匡堂垒耋担》丝垒堑堂墨垒蕉堂迨堑 有结果表明LISPOT检测293名可疑儿童结核病患者，阳性率83％，显著高于皮试阳性率 对无痰患者、儿章结核的诊断极为有利【3。最近的文献报道，新型ELISPOT技术操作更为 简便、快速，非常适合临床常规检钡：jt4j。 assay，PhaB) 3．噬菌体生物扩增法(Phageamplifiedbiologically PhaB的检测原理是分枝杆菌噬菌体能够感染MTB，并在菌体内增殖，未感染细菌的噬 菌体被随后加入的灭活剂灭活，增殖的噬菌体将细菌裂解，释放出的噬菌体可感染随后加 入的指示菌(一种快速生长的分枝杆菌)，并将其裂解，在琼脂平板上出现噬菌斑，根据噬 菌斑的有无即可判定待检标本中是否存在MTB。如将待检菌株(或涂片阳性标本)先与抗 可疑肺结核病人痰标本，结果敏感性为87％，特异性为83％。还有报道，PhaB检测涂片阴 性痰标本的敏感性为67％、特异性为98％。PhaB检测MTB对异烟肼、链霉素、乙胺丁醇、 吡嗪酰胺、环丙沙星的耐药性，结果与常规方法的符合率分别为94％、90％、87％、88％ 和100％tsl。我们的检测结果同样表明PhaB检测MTB耐药性快速、简便、准确。 Isothermal 4．恒温循环扩增法(Loop．MedimedAmplification，LAMP) 下进行PCR扩增，因此操作更为简便，反应更加快速，而且不需常规PCR扩增仪。其操 作步骤是将液化后的痰标本离心洗涤，抽提DNA后加入混合好的扩增溶液，65℃反应扩增 40min即可用肉眼观察结果，DNA扩增阳性标本呈现绿色荧光，反之为阴性结果。该法建 检测涂阳、培阳痰标本的敏感性为97．7％073／1