Sumo分子伴侣与富含二硫键的抗真菌肽Drs基因的融合有助于其可溶性表达.pdfVIP

维普资讯 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology，2007，27(12)：22—25 Sumo分子伴侣与富含二硫键的抗真菌肽Drs 基因的融合有助于其可溶性表达冰 肖业臣 秦玉侠 解佳森 刘孝菊 庞实锋 杨婉莹 李校垄 。 (1吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心 长春 130118) (2华南农业大学动物科学学院 广州 510642 3温州医学院药学院 温州 325035) 摘要 利用PCR引物延伸的方法合成了分子伴侣Sumo和抗真菌肽Drosomyein的融合基因，将其 插入到表达载体pET-3c中，构建出重组表达质粒pET-3c-SD，并转化至大肠杆茵BL21(DE3)中。 筛选重组转化子，进行表达条件的优化和表达产物的可溶性分析。结果表明在 30~C条件下，用 0．5mmol／LIPTG诱导3h后，目的蛋 白表达量最高，约 占茵体总蛋白的22％，其中可溶性蛋 白超过 了目的蛋 白的80％。经过Ni-NTA纯化后，融合蛋 白的纯度可达95％以上。抑菌实验表明，该融 合蛋白对白僵茵(Beauveriabassiana)具有一定的抑真菌活性。证实了使用分子伴侣 Sumo融合表 达对具有多个二硫键的小分子多肽的表达是非常有效的。 关键词 抗真菌肽 Drosomycin Sumo分子伴侣 中图分类号 Q786 真菌病在我国较为常见。近几年来，随着广谱抗 目前报道的抗菌肽类，除少数几种对真菌有抗性外，其 生素、糖皮质激素的大量使用、免疫抑制剂的广泛应 它绝大多数对丝状病原真菌 (filamentousfungi)无明显 用，烧伤抢救、放射治疗和器官移植的广泛进行，许多 的抑杀作用。Drosomycin是被发现对真菌具有广谱抗 原来不致病的和正常情况下治病性很弱的病原菌引起 性的抗真菌多肽，抗真菌活性较强 。 疾病 ，而且发病率逐年增加。目前，真菌感染已成为肿 Drosomycin(Drs)是 黑 腹 果 蝇 (Drosophila 瘤患者、免疫缺陷患者的主要死亡原因之一，尤以医院 melanogaster)免疫后体液 中产生 的一种抗真菌肽 内交叉感染最为明显 ¨l2]。 (antifungalpeptide)。实验发现，Drs对细菌无明显的生 目前临床上应用的抗真菌药物大都是通过破坏真 物学活性，但对多种丝状病原真菌显示 出强烈 的抗 菌的代谢途径或阻断大分子的生物合成来达到抗真菌 性 ]。而丝状病原真菌是造成植物真菌病害、动物和 效果，容易使病原真菌产生抗药性；同时也可能对宿主 人类真菌感染的主要病原，特别是在临床上，真菌耐药 细胞产生一定的毒性 。由于真菌细胞与人体细胞都 性的产生和快速发展已成为真菌感染防治上一个 日益 属于真核细胞，所以开发新型的多肽类抗生素药物，可 严峻的问题。因此，Drosomycin对于开发新的抗真菌药 能是彻底解决临床深部真菌病危害的有效途径。 物具有较好的应用前景。 国外方面，共有来 自细菌、昆虫、蛙、猪和人体的10 国内杨婉莹等 在大肠杆菌系统中表达了Drs基 因，蛋白以非可溶性的包涵体形式存在，不仅影响了蛋 多种抗菌肽进入临床试验，用于皮肤感染、导管感染、 白表达量和活性，而且增加了蛋白纯化步骤和成本。 泌尿生殖系统感染、胃溃疡等局部或者全身感染性疾 病 ，但专门用于研究抗真菌的多肽药物还鲜有报道。 本研究采用分子伴侣 Sumo融合 Drs基因表达，希望能 通过Sumo的助折叠功能实现Drs抗真菌肽的可溶性表 收稿 日期：2007-09-27 修回日期：2007—10．16