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DNA复制 中心法则 DNA双螺旋结构 DNA双螺旋结构 问题的提出 本章内容 第1节.复制的基本规律 第1节.复制的基本规律 第1节.复制的基本规律 第1节.复制的基本规律 第1节.复制的基本规律 第1节.复制的基本规律 第2节：DNA复制的酶学 DNA复制体系 复制是在酶催化下的核苷酸聚合过程,需要多种物质的共同参与: 底物：dNTP (dATP、dGTP、dCTP、dTTP) ； 模板(template)：解开成单链的DNA母链； 引物(primer)：提供3′-OH末端的寡核苷酸（RNA分子）； 聚合酶(polymerase)：依赖DNA的DNA聚合酶，简写为DNA-pol 或DDDP； 其他的酶和蛋白质因子 第2节：DNA复制的酶学 第2节：DNA复制的酶学 主讲：刘万宏 * All Right Reserved by Liuwanh 重庆科技学院化学化工学院 重点知识回顾 DNA通过复制将遗传信息由亲代传递给子代；通过转录和翻译，将遗传信息传递给蛋白质分子，从而决定生物的表型。DNA的复制、转录和翻译过程就构成了遗传学的中心法则。 重点知识回顾 DNA合成原料是dNTP 核苷酸通过磷酸3，5-二酯键连接 DNA中的碱基互补配对 重点知识回顾 1.主干链反向平行 2.侧链碱基互补配对 3.立体构象双螺旋 1 DNA为何需要复制？ 2 DNA的复制过程有没有共性？ 3 DNA复制过程如何？ 第5节： DNA的损伤与修复 第4节：逆转录和其他复制方式 第3节：DNA复制过程 第2节：DNA复制的酶学 第1节：复制的基本规律 内容提纲 1.1半保留复制 1.1半保留复制 概念 半保留复制（semiconser-vative replication）：DNA在复制过程中合成的新链与亲代DNA分子的碱基顺序完全一样。由于子代DNA分子中一条链来自亲代，另一条链是新合成的，这种复制方式称为半保留复制。 复制 亲代DNA 子代DNA 新合成的子链 1.1半保留复制 半保留复制实验证据 以15NH4Cl为唯一氮源培养大肠杆菌，使其DNA全部变成[15N]DNA； Step 1 Step 2 Step 3 Step 4 将上述细菌转入普通培养基（含14NH4Cl）培养； 提取各代细菌中的DNA分子； 氯化铯密度梯度离心，分析沉降区域密度。 米西尔逊-斯塔尔实验 1.2复制子与复制方向 概念 复制子(replicon) ：复制子是独立完成复制的功能单位。习惯上把两个相邻DNA复制起始点之间的距离（或DNA片段）定为一个复制子。 单向复制 双向复制 复制方向 1.3需要引物 知识点 参与DNA复制的DNA聚合酶，必须以一段具有3’端自由羟基（3’-OH）的RNA作为引物(primer) ，才能开始聚合子代DNA链。 RNA引物的大小，在原核生物中通常为50-100个核苷酸，而在真核生物中约为10个核苷酸。 RNA引物的碱基顺序，与其模板DNA的碱基顺序相配对。 1.4半不连续复制 3? 5? 3? 5? 3′ 5′ 3′ 5′ 解链方向 领头链 (leading strand) 随从链 (lagging strand) 3′ 5′ 1.4半不连续复制 概念 领头链 (leading strand） 以3’→5’方向的亲代DNA链作模板的子代链在复制时基本上是连续进行的，其子代链的聚合方向为5’→3’，这一条链被称为领头链(leading strand)。 随从链 (lagging strand) 以5’→3’方向的亲代DNA链为模板的子代链在复制时则是不连续的，其链的聚合方向也是5’→3’，这条链被称为随从链(lagging strand)。 冈崎片段 (Okazaki fragment) 由于亲代DNA双链在复制时是逐步解开的，因此，随从链的合成也是一段一段的。DNA在复制时，由随从链所形成的一些子代DNA短链称为冈崎片段(Okazaki fragment)。 DNA复制体系 1.解旋解链酶 ①拓扑异构酶（解超螺旋酶）：解开DNA的超螺旋 ②解链酶（解螺旋酶）：解开碱基对之间的氢键，形成2股单链 ③单链DNA结合蛋白：结合于单股DNA链，阻止DNA复性,防止单链被核酸酶水解（辅助因子，非酶） 2.引物酶：合成一小段RNA引物，用于DNA聚合酶延长子链 3.DNA聚合酶：在5’端由RNA（或DNA）的前提下，延长DNA子链 4.DNA连接酶：在随从链合成过程中，将不连续的DNA子链片段连接 2.1 解旋解链酶 拓扑异构酶 第2节：DNA复制的酶学 2.1 解旋解链酶 解链酶 解螺旋酶(helicase) ，又称解链酶或rep蛋白，利用ATP供能，作用