骨髓间充质干细胞构建组织工程化神经修复直肠癌手术自主神经损伤实验研究.pdfVIP

胃肠肿瘤学术研讨会暨胃癌高级培训班全国胃癌规范化治疗巡回演讲 论文集 骨髓间充质干细胞构建的组织工程化神经修复 直肠癌手术自主神经损伤的实验研究 宋新明何裕隆李明哲张漓陈志辉蔡世荣陈创奇黄奕华詹文华 中山大学附属第一医院胃肠胰腺外科 【摘要】背景及目的周围神经损伤并不少见，目前国内外对于外周神经损伤的修复主 要集中在有髓神经纤维(如坐骨神经、尺神经)的研究，对于无髓神经(植物神经)的组织 工程修复，尚未见相关的报道，本实验利用骨髓间充质干细胞作为种子细胞，分别与自体腹 oflactic and acids，PLGA)构建组织工程化人工神经， 膜及聚乳酸一聚羟乙酸(copolymer glycolic 探索其修复盆腔无髓神经的效果。方法制作比格犬盆腔腹下神经(无髓植物神经)10ram缺 stromal 损，用密度梯度离心法分离比格犬骨髓间充质干细胞bonemSITOW cells，BMSCs)并传 代扩增，分五组修复神经缺损：A组：BMSCs种植于胶原蛋白海绵内与PLGA导管构建组织工 程化神经修复神经缺损；B组：仅用胶原蛋白海绵与PLGA导管修复神经缺损；C组：将BMSCs 种植于胶原蛋白海绵内与自体腹膜构建组织工程化神经修复神经缺损；D组：仅用胶原蛋白 海绵与自体腹膜修复神经缺损；E组：自体神经移植。术后12周移植段神经通过大体观察、 免疫组织化学观察、电镜扫描、轴突计数等方法评价各组神经缺损修复的效果。结果术后 12周，各组再生神经均能通过缺损区长至神经远端，无神经瘤形成，PLGA导管基本吸收，各 组人工神经表面均有均有不同程度的血管侵入生长。A、C组再生神经纤维数量、密度、面积 百分比以及神经结构与E组相近，均优于B、D组，差异有统计学意义(P0．05)。结论BMSCs可 以作为种子细胞促进无髓神经纤维的再生，其与PLGA导管或自体腹膜构建的组织工程化人工 神经，用于外周无髓神经修复可以达到与自体神经移植相当的效果。 【关键词】骨髓间充质干细胞，组织工程，人工神经，自主神经，无髓神经 应用组织工程技术构建的人工神经修复外周神经损伤是一种新的治疗方法。目前国内外 学者利用人工神经修复有髓神经纤维(如坐骨神经、尺神经)缺损取得了可喜的效果。与自 体神经移植(外周神经修复的金标准)相当，而对于无髓神经(植物神经)损伤的修复，尚 未见相关的报道。事实上，无髓神经的损伤并不少见。直肠癌手术盆腔植物神经损伤导致的 术后性功能障碍和排尿功能障碍一直以来都是影响患者术后生活质量的焦点问题。本研究旨 在利用组织工程化人工神经完成无髓神经的修复再造，以比格犬盆腔自主神经损伤模型为研 究对象。利用骨髓间充质干细胞(BMSCs)与PLGA导管或自体腹膜构建人工神经，桥接移植 309 胃肠肿瘤学术研讨会暨胃癌高级培训班全国胃癌规范化治疗巡回演讲 论文集 修复缺损的盆腔自主神经，探索其修复无髓神经损伤的效果。 方法 比格犬骨髓问充质干细胞的分离培养 髂后上棘骨髓穿刺，抽取骨髓lOml，加入含低糖DMEM的无菌离心管中充分混合，经 200目不锈钢滤网过滤，悬液缓慢加入含Percoll淋巴细胞分离液(密度1．073 kg／L)的无菌离 心管中(体积比4：6)，2000 rpm，lOmin离心，小心吸取膜状的有核细胞层，PBS洗一次， 用含100ml／L胎牛血清、100u／mL青霉素、100u／mL链霉素的低糖DMEM培养基重悬细胞， 调整细胞密度以5×lO／mL接种于50mL培养瓶中，置于37℃、5％C02培养箱中孵育，24h后 更换培养