hcv多表位抗原的选择.docVIP

《丙型肝炎病毒多表位抗原在小鼠与家兔中的免疫应答》 选5个具有良好免疫原性高度保守Ｔ/Ｂ细胞表位,组合成一个ＨＣＶ多表位抗原基因,并与β半乳糖苷酶基因融合后在Ｅ.ｃｏｌｉ中高效表达了具有ＨＣＶ免疫特异性的ＧＺ ＰＣＸ抗原. 多肽Ｐ1(Ｃ:1～16ａａ), Ｐ2(Ｃ:132～141ａａ) Ｐ3(ＮＳ5:2781～2788ａａ), Ｐ4(ＴＴ:ＩＹＳＹＦＰＳＶＤ,592～600ａａ) Ｐ5(Ｅ1:317～326ａａ) Ｐ6(ＮＳ3:1445～1453ａａ) 《丙型肝炎病毒多表位抗原在恒河猴中的免疫应答及保护性试验》 从中优选了5个高度保守的T/B细胞表位，分别是 C: 1-16; C: 132-141; E1:317-326; NS3:1445-1453; NS5:2781-2788, 同时加入破伤风类毒素上的一个T细胞激活位点，设计成一个HCV多表位抗原基因PCX，与各半乳糖昔酶基因融合后，在E. Col i中高效表达了GZ-PCX融合蛋白，具有良好的HCV免疫特异性。 《ＨＣＶ复合多表位抗原基因表达及免疫原性的研究》 优选了5个高度保守的Ｔ细胞及/或Ｂ细胞表位,同时加入破伤风类毒素(ＴＴ)上的一个Ｔ细胞激活位点,各位点间以非极性的甘氨酸和脯氨酸分隔以保持表位的相对独立性,组合成一个ＨＣＶ复合多表位抗原基因。 表1　所选择的Ｔ/Ｂ细胞表位的来源、氨基酸序列及性质 来源 氨基酸序列及位置 特性 Ｃ ＭＴＳＴＮＰＫＰＱＲＫＴＫＲＮＴＮ(1～16) Ｂ Ｃ ＤＬＭＧＹＩＰＬＶ(132～141) Ｔ Ｅ1 ＲＭＡＷＤＭＭＭＷ(317～326) Ｂ ＮＳ3 ＴＧＤＦＤＳＶＩＤ(1445～1453) Ｂ/Ｔ ＮＳ5 ＥＬＩＴＳＣＳＳ(2781～2788) Ｔ ＴＴ ＩＹＳＹＦＰＳＶＤ Ｔ 《丙型肝炎病毒多表位抗原基因的克隆、表达及免疫原性研究》 5个具有良好免疫原性的高度保守BIT细胞表位，组合成一个多表位抗原基因PCX，这些表位分别来自核心蛋白(I一16aa, 132一141aa), EI(126一135aa), NS3(139一147aa)及NS5 (768一775aa)，此外还加入了破伤风毒素的一个T细胞激活位点以增强T细胞免疫。 《重组丙型肝炎病毒表位抗原的研究》 Ｃ抗原选择　 在ＲＩＢＡ3.0用的是ｃ22ｐ(10～53ａａ), 但根据文献报道在1～10位也有较强的表位。最近用重叠合成肽抗原研究,证明1～18ａａ和11～28ａａ相比,前者也有其自身的优势抗原位点,并用缺失突变研究进一步证明第9位氨基酸残基的缺失,可引起活性的明显丢失,所以在该抗原的选择上,在ＲＩＢＡ3.0ｃ22ｐ的基础上作适当延长(8～56ａａ)。 ＮＳ3抗原位点选择　 在ＲＩＢＡ3.0中选用ｃ33ｃｒ(1192～1457ａａ)的重组蛋白质 ,选用1192～1457位氨基酸残基。 ＮＳ4抗原位点的选择　 在ＲＩＢＡ3.0试剂中,ＮＳ4取了两个片段,一是5.1.1ｐ(1694～1735ａａ),二是ＮＳ4区Ｃ端,ｃ100ｐ(1920～1935ａａ)。 5.1.1片段型别间序列的变异较大,用合成肽研究显示其检出率并不高,所以只选择ＮＳ4 Ｃ端。根据我们以前的研究，适当向前后延长片段可以增加抗原活性;另外,文献上用重叠合成肽研究，也证明在ｃ100ｐ前后都有新的抗原表位。所以,我们选1916～1947ａａ,结果也证明我们的ＮＳ4活性较ＲＩＢＡ3.0高。 ＮＳ5抗原位点的选择 　根据多篇文献报道ＮＳ5抗原在ＲＩＢＡ3.0中对灵敏度的提高没有多大关系,况且ＮＳ5片段较大,原核表达较困难,所以我们根据在ＮＳ5中的主要抗原表位,扩增了2271～2313ａａ和2381～2452ａａ两个片段,然后加以连接,作为我们的ＮＳ5抗原。这样也可以减少非表位片段可能引起的非特异反应。 《抗HCV分片段酶联免疫检测试剂的临床评价》 C: 10-53 aa; NS3: 1 192-1 457 aa； NS4:1 916-1 947 aa; NS5:6 796-7 374 aa（原文是6 796-7 374 aa，但我觉得应该是6 796-7 374bp,所以应该是2265-2458aa） 《不同HCV优势抗原嵌合基因在大肠杆菌中的表达及其产物的分析》 构建两种嵌合基因NC1和NC2, NC1包括NS3的C33c