大实验三 米曲霉固体发酵制曲.ppt

* * 大实验三 米曲霉固体发酵制曲 1、学习固体发酵工艺 2、制备米曲霉固体曲，测定蛋白酶活力 实验目的要求 实 验 原 理 实 验 步 骤 1、制备麸皮固体培养基： 25g麸皮，加15ml水（加水量40%～60%），拌匀； 装茄瓶。 2、灭菌： 0.1Mpa 灭菌20～30min，冷却至室温。 已培养好的米曲霉孢子斜面一支，加入约10ml无菌水，洗下孢子，制成孢子悬液。 注意：勿使孢子飘落实验室 3、制备孢子悬液菌种： 实验步骤 (continued) 实验步骤 (continued) 每茄瓶加入孢子悬液2ml，抖动茄瓶，使孢子悬液与麸皮培养基混匀。 4、接种： 28℃培养4天 其间，于接种24～48h左右抖动茄瓶翻曲一次 观察记录菌丝生长及孢子形成情况 5、培养： 实验步骤 (continued) 另一次实验 实验步骤 (continued) 6、蛋白酶活力测定： 1）粗酶液制备： 向一茄瓶中加入无菌水约100ml，浸泡固体曲1h；过滤得粗酶液。 2）倒平板： 融化酪蛋白明胶双基质固体培养基，每人倒一平板。 实验步骤 (continued) 3）打孔： 打孔器经酒精燃烧灭菌后，每平板打1～3孔，并在酒精灯火焰上稍稍加热打孔处，使孔周围的培养基微融，然后平放冷却。 4）加样： 往孔内加入粗酶液适量（约100ul），可设对照。 实验步骤 (continued) 5）培养（反应）： 将加样后的平板小心平端放入30℃培养箱，放置20小时左右。 6）观察结果： 可直接观察透明圈有无、测定透明圈直径；也可向平板滴加少量10%三氯乙酸，以增强观察效果。 *