一株新奇的抗副猪嗜血杆菌单克隆抗体识别B细胞表位的鉴定和应用.pdfVIP

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会论文集 一株新奇的抗副猪嗜血杆菌单克隆抗体识别B细胞表位的 鉴定及应用 卓’，李 曦P 杨玉菊z，郑 楠，，符 芳一，柴 政t，姜福成3，王香玲1，张雪云4，王 (1．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室．黑龙江哈尔滨150001；2．哈尔滨学院， 黑龙江哈尔滨150001；3．黑龙江八一农垦大学．黑龙江大庆163319；4．哈尔滨师范大学，黑龙江哈尔滨150080) blot 研究结果为进一步研究H．parasuis感染的病原学诊断建立了良好的基础。 关键词：副猪嗜血杆菌；ABCT；OppA；病原学诊断 免疫原，成功制备质量优良的MAb一株，为该病 副猪嗜血杆菌(H．parasuis)属巴氏杆菌科嗜血杆 菌属，NAD依赖型、革兰氏阴性细小杆菌，能够引 的快速准确诊断提供了强有力的工具。 起猪格拉泽氏病(Glasseesdisease)，通常可在健康猪 的上呼吸道分离得到Ill。该病已经成为导致仔猪死 1材料和方法 亡率高的一个重要原因，给世界养猪业造成严重的 1．1 经济损失1241。目前H．parasuis的病原学诊断方法包菌株、细胞与实验动物H．parasuis标准菌株 括细菌分离、免疫组化(IHC)技术、寡核普酸特异性 捕获圆盘杂交(OSCPH)实验、PCR等，但这些方法 都存在许多不足，如细菌的分离鉴定往往不能成功， 1G7细胞 乳酸菌(LAB)、SP2／0细胞、蓝耳病MAb 用于IHC技术诊断的某些多克隆抗体与胸膜肺炎放 株由本实验室保存，BALB／c小鼠购于中国农业科 线杆菌(A．pleuropneumoniae)有交叉反应，OSCPH方学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心。 法中与吲哚放线杆菌(A．indolicus)有交叉反应，基于 16S rRNA的测序引物在以A．indolicusDNA作为模 板时可以观察到一条弱带lsI。H．parasuis感染的血清 学诊断包括补体结合试验(cF)和间接血凝试验 A／G (IHA)，以及酶联免疫吸附试验(ELISA)等，但这些肽库购自NEB公司；Protein 方法不准确151，因此，研制特异性良好、遗传性状 Santa Cruz公司；辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊 稳定和种间广谱的单克隆抗体(MAb)成为当务之急。抗鼠IgG二抗购自北京中杉金桥公司；RIPA裂解液 5型强毒株(HPS一5)作为 本研究利用H．parasuis (中)、苯甲基磺酰氟(PMSF)均购自碧云天公司。 一223— 中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会论文集 1．3动物免疫与细胞融合将100 进行试验，结果表明：MAb Ixg的菌体蛋白 与等体积的FCA充分乳化免疫小鼠，每间隔2周，阳性反应，在约58l(u处出现目的条带，证明该 将等量抗原与等体积FICA充分乳化进行第2次、 第3次免疫。加强免疫第4d，进行细胞融合，具 好的反应性特异性。 体步骤参照文献[6】进行。 1．4 阳性杂交瘤细胞株的筛选与克隆 采用间接 ELISA方法检测为阳性的细胞集落，利用有限稀释 法进行3次亚克隆。 1．5 MAb腹水的制备