影响多次给药毒性试验研究结果因素探讨.pdfVIP

第九届中南地区实验动物科技交流会论文汇编 动物实验研究  影响多次给药毒性试验研究结果的因素探讨 薛敬礼，朱奎成，章金涛，杜春燕，史崇敏 郑州大学实验动物中心，郑州  450052  【摘要】 多次给药毒性试验是药物非临床安全性研究中最复杂、最重要的内容，是判断药物安全 性的核心试验。本文对多次给药毒性试验中给药剂量、检查指标、检查次数、指标敏感性、病理组织学 检查和常见问题等，为多次给药毒性试验结果分析提供参考。 【关键词】 多次给药 毒性试验 药物安全 多次给药毒性试验是药物非临床安全性研究的有机组成部分，他是综合性最强、获得 信息最多，对临床指导意义最大的一项毒理学研究，对其研究结果进行评价时，应结合受 试物的化学结构特点，药效学、药代动力学和其它毒理学研究的结果，以及已取得的临床 研究结果，进行综合评价。  1  给药剂量的选择 主要是高剂量的选择，因低剂量—般为药效学有效剂量的 2­5 倍左右。高剂量的选择 没有成熟的方法，多数国家的经验是先进行预试验。Traian （1983）推荐先从大鼠的单次给 药试验中找出最大无症状剂量，再分别以最大无症状剂量及该剂量的 1/3 和 1/10 量给三组 大鼠（雌雄各半）连续服药 2­3 周，从中选出多次给药试验的最高剂量。狗、猴等大动物 多次给药毒性试验的给药剂量约为是大鼠剂量的  1/2。Hombuger （1983）的方法是先选择  —个剂量给雌雄各 ５只大鼠，连续服药２周，如无动物死亡剂量再增加一倍，直至出现死 亡。相反，如果初试剂量就出现死亡，则剂量减少一倍，直至出现无死亡动物为止。依此 结果计算出动物最大耐受量（MTD），MTD 便可作为多次给药毒性试验的最高剂量。 中药复方多次给药毒性试验的高剂量尽可能采用最大给药量或出现明显中毒甚至个别 动物死亡的剂量。  2  技术指标的选择 《指导原则》中列出的技术指标是多次给药毒性试验通用的常规性指标，对于不同的 药物应选择相应的指标。首先应根据药物的类型及性质选择，如造血类药物除外周血常规 性指标外，还要选择骨髓细胞培养、骨髓细胞分类等指标。其次应选择药效学试验有效的 指标，如提高或抑制免疫的药物，应增加药效学试验中敏感的免疫学指标。 872  第九届中南地区实验动物科技交流会论文汇编 动物实验研究  3  技术指标检查次数 多次给药毒性试验不但要了解实验动物会出现哪些毒性反应，还要了解毒性反应出现 的时间、持续时间，是否有迟发性毒性反应等情况。如果试验中指标检查的次数太少，就 不能回答上述问题；指标检查次数太多，又会增加工作量和动物数量。  4  技术指标的敏感性  4.1  在血液学检查中，外周血网织红细胞计数是最灵敏的指标，但因计数时波动较大，致 少要观察 2000个以上红细胞内出现的网织红细胞数。  4.2  尿液试纸法检测动物尿液，主要观察阳性结果与给药是否有量效关系。因大鼠、狗甚 至猴正常情况下也会出现蛋白质、潜血阳性。大鼠和狗尿中常有 BIL，因为这两种动物BIL  肾阈都较低，可以大量从尿中排出。  4.3  肝功能指标 ALT、AST、ALP 及 BIL 中，ALT 比较敏感，AST 易受标本溶血的影响， 生长迅速的年轻大鼠 ALP 可能比成年大鼠高 2­3倍，故要强调组间比较。  4.4  肾功能有很大储备量，肾脏受损病理异常时，也未必见到血中 BUN 和 Cre 升高。狗 的BUN 因室温高而升高，故实验室要注意温度控制。  4.5   TP 和 Alb 在营养不良或肝、肾功能多次给药损害时可降低；免疫功能增强(感染)或自 身免疫功能亢进时，球蛋白增高，相反则偏低。  4.6  血糖(Glu)的高低主要与胰岛素有关，但当甲状腺、肾上腺和垂体功能亢进时Glu 亦升 高，在试验结果的讨论中要加以分析。  5  病理组织学检查 动物解剖前要称体重，但一定注意此时的体重是指放血后的体重，因为脏器重量是失 血后的重量。总结报告中脏器重量和脏器系数均要列表，因有些器官的绝对重量有临床意 义，另一些器官