猪圆环病毒2型Cap蛋白和白细胞介素-2重组腺病毒的构建和鉴定.pdfVIP

中国畜牧兽医学 畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学 兽医免疫分 第七次研讨 会论文集 猪圆环病毒2 型Cap 蛋白与白细胞介素-2 重组腺病毒的构建与鉴定 1,2 1* 1 2 潘群兴 ，何孔旺 ， 永山 ，黄克和 ， ( 1. 江苏省农业科学院兽医研究所，江苏 南京 2 100 14 ；2. 南京农业大学，江苏 南京 210095 ；) 摘 要：猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)是近年来新发现的引起仔猪多系统衰弱综合症的必需病原，含有两个主要 的阅读框 ORF1 和 ORF2 ，分别编码复制相关蛋白(Rep) 和核衣壳蛋白(Cap) ，其中Cap 含有病毒主要抗原表位， 。 。本研 是研究PCV2 基因工程苗的主要候选目的基因 IL-2 是重要的细胞因子佐剂，能够增强疫苗的免疫效果 究利用PCR 技术将PCV2 Cap 蛋白基因和IL-2-Cap 串联基因分别克隆入人 5 型腺病毒穿 载体(pShuttle-CMV) ， 与腺病毒骨架载体(pAdEasyTM) 共转化大肠杆菌 BJ5183 进行同源重组并转染HEK-293A 细胞，经多次亚克隆获 得 了重组腺病毒 rAd-Cap 和 rAd-IL-2-Cap 。 定其 TCID50 为 1010.6/mL ，1010.2/mL 。利用 RT-PCR 、IFA 、间接 ELISA 、Wester blot 等方法以及 IL-2 ELISA 试剂盒分别检 猪圆环病毒 2 型 Cap 蛋白和 IL-2 的体外表达情况， 结果证明了两基因在腺病毒中获得了表达。该研究为发展 PCV2 的重组腺病毒基因工程疫苗奠定了基础。 关键词：PCV ；Cap 蛋白；白细胞介素；重组腺病毒 猪圆环病毒(Porcine circovirus ，PCV) 属于圆环 明Cap 蛋白具有较好的免疫原性，能诱导机体产生 ， 病毒科圆环病毒属，是迄今发现的一种最小的动物 较强的抗体反应 因此，Cap 蛋白已成为研究基因 病毒，直径仅为 17 nm ，无囊膜，其基因组为单股 工程疫苗的候选基因。 DNA [ 1] 。PCV 有 PCV1 和一条长约 1.76 kb 的PCV2 细胞因子佐剂中白细胞介素 -2 (IL-2) 应用最为 。 [2 ，3] ，包括 两个基因型 PCV-1 是最早由Tischer 等从猪肾细 广泛。IL-2 可作用于多种效应细胞 T 、B 淋 。用 、 对免疫应答具有 胞(PK-15) 中发现并分