猪传染性胃肠炎病毒S基因B、C抗原位点的原核表达和免疫活性.pdfVIP

猪的传染病 3 小结和讨论 （1）通过对哺乳仔猪腹泻样品中TGEV 抗原的连续检测，证实在 TGE 非流行季节，母猪舍的环 境中没有 TGEV 的存在。 （2 ）通过2 个年度对 7—10 月份连续 4 个月的育肥猪血清中 TGEV 抗体的检测，证实在 TGE 非 流行季，保育舍和育肥舍的环境中没有 TGEV 的存在。 （3 ）由于 TGE 和 PED 的临床症状非常相似，临床上很难区分；因此我们建立了能够区分 TGE V 和 PEDV 的多重RT-PCR 方法对腹泻粪便进行检测，其得出的结果是可信的。 （4 ）由于TGEV 和 PRCV 的抗体有交叉反应，因此我们选择了能够区分这二种抗体的鉴别 ELI SA 方法进行 TGE 母源抗体和感染抗体的检测，其得出的结果是可信的。 （5 ）终上所述，在TGE 流行过后，TGEV 不会在感染猪群中持续存在；TGE 的每年季节性流行 是由于外界病原的传入所致。有关 TGEV 感染后在猪体内的带毒持续时间有待进一步研究。 （6 ）鉴于目前我国使用的TGE 商品化疫苗均为肌肉或穴位注射，很难产生较好的胃肠道局部粘 膜免疫，而且母猪接种后母源抗体的维持时间仅为 1-2 周，所以单纯依靠疫苗预防常常会出现免疫失 败的现状。根据 TGEV 感染后不会在猪体内长期带毒、形成持续感染的特点，我们建议规模化猪场对 TGE 的预防主要应做好车辆、人员进出等生物安全措施。从我们调查的 5 个猪场中有 1 个已连续 3 年 多没有发生过 TGE、有 2 个场已 2 年多没有发生过 TGE 的事实证明：通过加强生物安全措施完全可 以有效地预防TGE 的发生。这也是国外在推行TGE 净化的理论依据（1）。 （7 ）从2010 年开始流行全国的猪流行性腹泻（PED ），其流行规律与TGE 相似（1）；在我们调 查的 5 个猪场中同样有 1 个已连续 3 年多没有发生过 PED 的流行、有2 个场已 2 年多没有发生过 PE D 的流行。 参考文献（略） 猪传染性胃肠炎病毒 S 基因 B 、C 抗原位点的原核表达与免疫活性 1 1,2* 1,2 1,2 1 1， 1 1 1， 汪洋阳 ，黄小波 ，曹三杰 ，文心田 ，张鑫淼 ，段素芬 阳酉萍 ，张丹 ，张小会 （1. 四川农业大学动物医学院，动物传染病与基因芯片实验室，四川雅安，625014 ；2 ．四川农业大学人兽共患病研 究室与猪病防治研究中心，四川成都，611130） 摘 要 本研究开展了猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）S 基因的 B 、C 抗原位点区域的原核表达与免疫活性研究。根据 S 基因的 B 、C 抗原位点区序列设计一对引物，从 S 基因克隆质粒 19T-S1 扩增了含 B 、C 抗原位点的基因片段 （以SBC 表示）。将 SBC 插入 pMD19-T 载体构建了 19T-SBC，再用EcoR Ⅰ/HindⅢ酶切 SBC 亚克隆至 pET-32a （＋）构建了重 组质粒 pET-32a-SBC 。将pET-32a-SBC 转入 BL21 进行诱导表达，并确定其最佳表达条件。亲和层析纯化重组 SBC 蛋 白，分别免疫兔和猪制备阳性血清，并测定了抗体效价和抗体活性。结果表明的SBC 基因片段大小为 549bp，pET-32a- SBC 在大肠杆菌中的最佳表达条件为 IPTG 诱导浓度为 0.6mmol/L、最佳诱导时间为4h ，最佳诱导温度为 32℃，重组 SBC 蛋白约为 20.1KDa ，主要以包涵体形式存在于细胞质中。琼脂扩散试验测定兔抗 SBC 蛋白血清和猪抗 SBC 蛋白 分别为 1:16 和 1:8，间接ELISA 测定效价分别为 1:1280 和 1:640。Western blot 结果证实重组 SBC 蛋白与兔抗 SBC 蛋 白血清、猪抗SBC 蛋白血清以及猪抗 TGEV 阳性血清均发生特异性反应。本研究建立了 SBC 的原核表达系统并证实 重组 SBC 蛋白具有良好的免疫活性，为开展 SBC 的应用研究奠定了基础。 关键词 猪传染性胃肠炎病毒；S 基因；B 、C 抗原位点；原核表达；免疫原性 猪传染性胃肠炎（Transmissible Gastroen