海马齿甜菜碱醛脱氢酶基因在大肠杆菌中表达.pdfVIP

分子植物育种，2014年，第 12卷，第 6期，第 1275—1280页 MolecularPlantBreeding，2014，Vo1．12，No．6，1275—1280 研究报告 ResearchReport 海马齿甜菜碱醛脱氢酶基因在大肠杆菌中表达 杨成龙 - 刘姣 周扬 ，3,4 李瑞梅 段瑞军 符少萍 胡新文 。 郭建春 1中国热带农业科学院热带生物技术研究所，农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室，海 口，571101；2贵州省亚热带作物研究所 兴义，562400；3海南大学农学院，海 口，570228；4华中农业大学植物科学技术学院，武汉，430070 同等贡献作者 通讯作者，jianchunguoh@163．com 摘 要 本研究利用从海马齿中克隆到的甜菜碱醛脱氢酶基因构建到高效表达载体pGEX一4T一1上，构建 重组载体pGEX一4T．OSBADH，并对 GST．SpBADH融合表达的IPTG诱导浓度、诱导不同温度、不同菌液浓 度和诱导时间等条件进行优化 。研究结果表明：随诱导时间增长 GST．SpBADH融合蛋 白表达量提高，在 37~C时，OD为 0．6左右，诱导 5hGST—SpBADH融合蛋 白的表达量达到最大，在 0．2mmol／LIPTG浓度下， 可以有效诱导GST—SpBADH融合蛋 白的表达。本研究结果以期解析SpBADH基因的功能以及在海马齿抗 盐过程 中的作用机理。 关键词 海马齿，甜菜碱醛脱氢酶，原核表达 ExpressionofRecombinantBetaineAldehydeDehydrogenaseofSesuvium portulacastrum inEscherichiacoli YangChenglong，z。 LiuJiao ZhouYang1,3,4 LiRuimei DuanRuijun FuShaoping HuXinwen GuoJianchun ’ 1InstituteofTropicalBioscienceandBiotechnology,KeyLaboratoryofBiologyandGeneticResourcesofTropicalCrops，Ministry ofAgriculutre， ChineseAcademyofTropicalAgriculturalSciences，Haikou，571101；2OuizhouInstiutteofSubtropicalCrops，Xingyi，562400；3CollegeofArgicul- tureHainanUniversity,Haikou，570228；4CollegeofPlnatScienceTechnoloyg，HuazhongAgriculturalUniversiyt，Wuhan，430070 TheseauthorscontributedequallytOthiswork Correspondingauthor．jianchunguoh@163．com DOI：10．13271~．mpb．012．001275 Abstract A full—lengthbetainealdehydedehydrogenasegenesequenceofSesuvium portulacastrum wascloned intothehighexpressionvectorpGEX一4T一1，andnamedpGEX一4T一p占 D日．TheGST—SpBADH ufsionprotein wasexpressedinducedbyIPTG．TheexpressionconditionssuchasIPTG concentration，thebacterium concen- tration．induction timeandtemperaturewereoptimized．Theresultsshowed thattheexpression levelofGST— SpBADH wasincreasedbyaccompanyingwiththeinductiontime．Intheconditionof37℃ ，OD600iS0．6and culutred5hours．GST．SpBADHufsionproteinreachedthehighestexpression．0．2mmoI／LconcentrationofIPTG caninduceGST—SpBADH expressioneffectivelyinEscherichiacolexpressio