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三、“分子运输车”—载体 作用：将外源基因送入受体细胞。 常用的运载体： 质粒 噬菌体的衍生物 动、植物病毒等 质粒： 来源：原核生物 结构：环状双链的DNA分子 想一想：为什么质粒可以作为载体 4.如果载体对受体细胞有害怎样？不能分离怎样？ 2.假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？ 1.作为载体没有切割位点将怎样？ 3.假如目的基因导入受体细胞，你如何去察觉？ * * * * *  发光的烟草 1.1 DNA重组技术的基本工具 专题1 基 因 工 程 澄迈中学：王江云 什么叫基因工程？ 基因工程又叫基因拼接技术或DNA重组技术。该技术是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。 （一）基因工程的概念 （一）基因工程的概念 结果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的基因产物 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 我国自主知识产权—抗虫棉花 问题：苏云金芽孢杆菌具有抗虫基因，如何利用基因工程技术来生产抗虫棉花？ 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 棉花细胞(含抗虫基因) 棉花植株(有抗虫特性) 上述培育抗虫棉的关键步骤是什么？ 重组DNA 导入 形成 基因工程培育抗虫棉的关键步骤： 关键步骤一： 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 关键步骤二： 形成重组DNA 关键步骤三： 重组DNA导入受体(棉花)细胞 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？ DNA重组技术的基本工具 关键步骤一的工具： 关键步骤二的工具： 关键步骤三的工具： 分子手术刀—限制性内切酶 分子缝合针—DNA连接酶 分子运输车—运载体 ——限制性核酸内切酶（简称限制酶） 一、 “分子手术刀” 1.来源： 猜一猜：限制酶存在于原核生物中的作用是什么呢？ 将外来的DNA切断，即能够限制异源DNA的入侵并使之失去活动，但对自己的DNA却无损害作用，保护细胞原有的遗传信息。 主要从原核生物中分离出来 2.作用特点：具有特异性 例如： EcoR1限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 Sma1限制酶能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切开 能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列，并在特定部位将其切断 限制酶切割的是— 每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 3.切点：磷酸二酯键 磷酸二酯键 学生活动： 用“剪刀”代表限制酶，纸条上的碱基序列代表限制酶识别的序列，请剪下碱基序列被限制酶切割后，所形成的结果 EcoR1限制酶识别的GAATTC序列 EcoR1限制酶 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 Sma1限制酶识别的CCCGGG序列，并在C和G之间切开 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。 小结：限制酶 1.来源：主要从原核生物中分离出来。 2.作用特点：具有特异性，识别特定核苷酸序列，在特定部位切割 3.切点：磷酸二酯键 4.切割结果：黏性末端、平末端 二、“分子缝合针”—DNA连接酶 1.分类 E.coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 作用：将切下来的DNA片段拼接成 新的DNA分子 A A T T G C C T T A A G 2.缝合的位置：磷酸二酯键 E.coliDNA连接酶，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接。 T4DNA连接酶，既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端，又可以“缝合”双链DNA片段的平末端，但连接平末端之间的效率比较低。 DNA连接酶 DNA聚合酶 连接DNA链 双链 单链 连接部位 在两DNA片段之间形成磷酸二酯键 将单个核苷酸加到已存在的核酸片段的3’末端的羟基上，形成磷酸二酯键 想一想：DNA连接酶和DNA聚合酶有什么区别呢？ 巩固练习 限制酶在DNA的任何部位都能将DNA切开吗？以下是四种不同限制酶切割形成的DNA片段： (1) …CTGCA??? (2) …AC??? (3) GC… ?? …G??????????? …TG??????? CG…（4） …G????? (5)????G…? (6) …GC ????? …CTTAA???? ACGTC…????? …CG (7) GT…???????(8)AATTC… ???? CA…?????????????