中国明对虾天门冬氨酸转氨酶基因的克隆及氨氮胁迫对其时空表达的影响.pdfVIP

中国水产科学 2014年 l1月，21(6)：1125—1133 JournalofFisherySciencesofChina 研 究论文 DoI：lO．3724／SP．J．1118．2014．01125 中国明对虾：~f-J冬氨酸转氨酶基因的克隆及氨氮胁迫对其时空 表达的影响 李少飞 一，何玉英2，李吉涛2，李健2，刘萍2，葛倩倩2， 1．大连海洋大学 水产与生命学院，辽宁 大连 116023； 2．中国水产科学研究院 黄海水产研究所，山东 青岛 266071； 3．中国海洋大学，山东 青岛 266071 摘要：利用 RACE技术克隆获得中国明对虾 (Fenneropenaeuschinensis)天 门冬氨酸转氨酶 GOT基因(FcGOn。 FcGOT基 因cDNA全长为 1910bp，其中，开放 阅读框 1284bp，编码 427个氨基酸。同源性分析表明，中国明对 虾天门冬氨酸转氨酶 GOT氨基酸序列与其他节肢动物高度保守，与克 氏原螯虾 (Procambarusclarkii)和桔粉蚧壳 虫 (Planococcuscitri)的同源性分别为78％和73％。系统进化分析表 明，FcGOT基因氨基酸序列与克氏原螫虾GOT 聚为一支。组织表达分析发现FcGOT基因在肝胰腺、鳃 、血细胞、肌 肉、心脏、淋巴中均有表达，其 中肝胰腺中 表达量最高 。氨氮胁迫后，荧光定量 PCR分析结果表明，FcGOT基因在肝胰腺和鳃组织中的表达与对照组相 比具 有显著差异(尸0．05)，表明 FcGOT基因在氨氮代谢方面具有重要的作用，参与了中国明对虾机体的急性氨氮胁迫 应答反应。 关键词：中国明对虾；天门冬氨酸转氨酶；基因克隆；基 因表达 中图分类号：$945 文献标志码：A 文章编号：1005—8737一(2014)06—1125—09 中国明对虾 (Fenneropenaeuschinensis)是 中 phosphate，PLP)和磷酸吡哆胺(pyrodoxaminepho。 国重要的海水养殖种类，具有较高的经济价值。 tophate，PMP)之间的转换来完成氨基的转运 】。正 近年来，养殖过程中管理不当常致使水体环境氨 常情况下，生物体 内的氨主要源于氨基酸分解代 氮升高。氨氮作为水产养殖环境中普遍存在的一 谢，天门冬氨酸转氨酶可催化谷氨酸与草酰乙酸 种有毒物质，主要 以非离子氨 (NH3)和离子氨 反应生成天冬氨酸，天冬氨酸参与联合脱氨基作 (NH4)两种形式存在，二者处于动态平衡。NH3 用产生氨 o-。与此同时，在哺乳动物线粒体内， 不带 电荷，具有较高的脂溶性，能穿透细胞膜， 天冬氨酸是尿素形成时氨基的直接来源 ¨…，因此， 对生物造成毒害作用。氨氮主要影响甲壳动物的 天门冬氨酸转氨酶与氨氮 的产生和排泄具有密切 呼吸、代谢、神经、免疫、渗透调节、排泄及蜕 联系。近年来，对 GOT在氨代谢过程中作用的研 皮和生长，严重会导致死亡 l【J。天门冬氨酸转氨 究逐渐深入，在脊椎动物中，McKenna等 lJ研究 酶(GOT)广泛存在于真核生物体 内，是转氨反应 表明天门冬氨酸转氨酶在鼠脑氨氮代谢过程中起 的高效催化剂，通过辅酶在磷酸吡哆醛(pyridoxal 关键作用，5mmol／L谷氨酸盐胁迫可显著降低 收稿 日期 ：2013．12．18；修订 日期 ：2014-02—17． 基金项 目：国家 自然科学基金项 目；国家虾产业技术体系专项项 目(CARS一47)；山东省 自主创新专项项 目(2013CX- 80202)；公益性行业(农业)科研专项(201103034)；国家 863计划项 目 (2012AA10A409)． 作者简介：李少飞(1987一)，女，硕士研究生，研究方向为氨氮代谢功能基因．E-mail：lishaofei1019@·163．tom 通信作者：李健 ，研究员．Tel：0532E—mail：lijian@ys衔．ac．ca 中国水产科学 第 21卷 GOT活性。在节