抗菌肽CP和抗生素的体外联合药效研究.pdfVIP

第四次猪病学术研讨会会议论文集 3讨论 乳酸菌在食品T业中应用广泛，被公认为安伞的(generally 物。以乳酸菌作为宿丰菌，构建表达载体用来表达异源蚩白和酶，逐渐成为食品工、lk、生物制药和 疫苗研究的热剧k纠】。近年来，乳酸菌的分子微生物学研究取得了重大进展，这为表达载体的构建 奠定了基础，一些具有不同用途的乳酸乳球菌基冈表达载体已经构建，用来表达抗原蚩白、细胞因 子和生物酶等。其中，以来源于食品级微生物的DNA片段构建的食品级表达载体引起人们的关注。 乳酸菌食品级表达载体必须具备的一个基本条件是表达载体的选择标志必须是食品级的。 传统的乳酸蔚载体为保持一定的选择压力，大多带有一个或多个编码特定抗牛素抗性的基因。 但将带有抗生素抗性摹冈的载体投放到环境、人或动物体内，存在抗性基因转移的町能。为了避免 抗生素抗性标记所引起的危害，最有效的办法足使用食品级选择标志，这些标志基因都来源于对人 体和环境安伞的食晶级微生物。目前用于乳酸菌食品级表达载体的选择标记丰要有细菌营养缺陷型 互补标志、糖类利用标志、细菌素抗性标志等Il¨4。。 伞性高，可以分解蜜一糖，向．多数乳酸菌不能利用蜜二剖圳。利用此性质，本研究以对人体无害的 植物乳杆菌基因组DNA为模板，成功克隆出了melA基冈，以此作为食品级筛选标记插入剑大肠杆 菌和乳酸菌的穿梭钱体pMG36e 中的红霉素抗件基因，使构建的载体安伞性达到食品级。此外，以，，lP阴作为食品级筛选标记的活性 及筛选稳定性还需要进一步的研究。 参考文献(略) 抗茵肽CP与抗生素的体外联合药效研究 牛明福1李翔2王臣1宫强1陈溥言2 (1．河南科技大学河南洛阳471003：2．南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断和免疫重点实验室江苏 南京210095) 摘要为了研究抗菌肽的抗菌效果及与抗生素之间的协同效果，应用基因工程方法表达了抗菌肽cP。在本试验 中，选取几种常用的抗茵药物(青霉素、链霉素、卡那霉素．环丙沙星、新霉素、四环素．多粘菌素B、诺氟沙星 和头孢菌素)，分别测定它们对几种细菌的最小抑菌浓度(MICl，初步探讨抗菌肽cP与它们联合应用后的抗菌活性， 并采用分级抑制浓度指数(FIC)来定量检测抗菌肽与抗生素之间的抗茵作用关系。结果发现，抗菌肽CP与不同抗生 素之间的抗菌作用关系因细菌种类而不同，抗菌肽与卡那霉素、链霉素、四环素及多粘菌素B联用对几种细菌都有 不同程度的协同或相加作用。说明该抗菌肽与某些种类抗生素之间确实存在协同或者相加作用，可以在一定程度上 减少甚至替代抗生素的使用，为临床应用提供了理论依据。而该抗菌肽与其他种类抗生素之间的关系，有待进一步 研究。 关键词抗菌肽；抗生素：联合药效 抗菌肽足一类免疫效应因子，它在机体的先天非特异性免疫中起重要作用，构成了低等动物机 体快速有效的免疫机制。随着人们对抗菌肽的抗菌机理和抗生素的耐药机理的深入研究，发现抗菌 用存在协同作用，町以增强对嗜麦芽寡食单胞茼的抗菌活性；Zhang等¨1合成的富含Pr0的抗菌肽 J设计5种小同 与多粘菌素E等抗牛素联合使用可增强对大肠杆菌uBl005抗菌活性；UlvatIle等lj 的短肽，分别与红霉素或利福半联合对大肠杆菌ATCC25922具有协同作用。 对抗菌肽与抗生素的协同性研究可以减少临床上抗生素的使用剂量，或者用抗菌肽完全替代某 些抗生素，凶此对抗菌药物的开发和应用具有深远意义，但目前幽内在这方面的研究工作还很少。 作者采用基凶工程方法在巴斯德毕赤酵母中表达的一种抗菌肽CP，经研究表明其对人肠杆菌、 其他论文 沙I、J氏菌锋有极强的抗菌活性，而且具有良好的酸热稳定性‘41。为了解该抗菌肽与抗牛素之间是否 也存在协同作用，为抗菌肽的开发提供理沦依据，本实验比较研究了它与临床9种抗菌药物对几种 常见致病菌的体外抗莳活性。 l材料和方法 1．1抗菌肽、菌株及抗生素 纯化的抗菌肽CP，95“∥m“41。 由本试验室保存。 氨苄青霉素(AMP)、硫酸链霉素(STR)、卡那霉素(KAN)、新霉素州EO)、四环素(TET)、多粘 菌素B(PB)购自南京生必牛物技术有限公司；诺氟沙星(NOR)、头孢菌素(CEP)、环丙沙星(CIP)购自 校医院。 1．2细菌