流行性乙型脑炎病毒E蛋白单克隆抗体的制备和鉴定.pdfVIP

病毒病一猪流行性乙型脑炎 用该方法对日本乙型脑炎病毒入侵细胞的内各途径进行了初步研究。 l Real．timeRT．PCR检测JEV方法的建立 标准品，建立了实时荧光定量聚合酶链式反应(Real．timeRT．PCR)检测JEV的诊断方法。通过检 测10倍系列稀释的JEV标准质粒模板显示，该方法的灵敏度能达到15copies。对不同浓度的质粒标 准品进行组内和组问重复性实验，其变异系数(CV)均小于5％，显示该方法具有良好的苇复性： rz=0．997，PCR循环效率为96．53％：研究结果表明，该方法快速、灵敏度高、特异性强、重复性好 且能实时定量检测，可用rJEV分离鉴定、JEV感染疑似病例检测、JEV感染定量检测研究及其分 子流行病学调查。 2 日本乙型脑炎病毒入侵BHK．2l细胞的内吞途径初步研究 本试验选用氯丙嗪、制霉素和细胞松弛素D三种药物分别处理细胞，以阻滞网格蛋白介导内吞 途径、细胞膜穴样内陷途径和H胞饮途径，然后进行JEV感染实验，通过Real一timeRT．PCR方法测 h、12h、24 定感染后l h细胞内的病毒拷贝数，结果显示：与仅实施感染实验、未进行药物处理的 对照组比较，三个药物处理组的细胞内病毒拷贝数，在感染后各时相点均呈现不同程度的r降，其 h、12h、24 中氯丙嗪处理组下降最为明显，感染后l h细胞内病毒拷贝数分别下降了59．58％，53．34 ％，61．35％；而细胞松弛素D和制霉素处理组仅有少量F‘降。存感染后lh、12h和24h，细胞松弛 素D组细胞内病毒拷贝数分别卜．降r23．59％，30．77％，30．14％；制霉素组细胞内病毒拷贝数分别 进入BHK．21细胞。 流行性乙型脑炎病毒E蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 赵付荣1’2周东辉1华荣虹2王斌2陈娜莎2阿合买提·买买提1步志高2‘ (1．华南农业大学兽医学院广东广州510642：2．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部兽医公共卫生重点开 放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001) vims，JEv)是一种严重危害人畜健康的虫媒病毒。表面囊膜蛋白 摘要流行性乙型脑炎病毒(JapalleseencephaIitis (E蛋白1是该病毒的主要结构蛋白。本研究利用原核表达的乙型脑炎病毒sAl4．14．2株结构蛋白E蛋白作为免疫原， 免疫6周龄BALB／c小鼠，采用淋巴细胞杂交瘤技术进行融合，经有限稀释法获得l株特异性针对JEvE蛋白的杂 bIot证实所得杂交瘤细胞分泌的 交瘤细胞，命名为5D4，经测定5D4单抗亚类属于IgG2a，轻链为K链。经wbstem 抗体可特异地与JEvE蛋白结合。结果表明，所制备的抗JEVE蛋白的单抗对病原检测具有很高的特异性，为JEv 准确快速的病原诊断和JEV感染相关的基础性研究提供了物质基础。 关键词 乙型脑炎病毒；E蛋白；单克隆抗体 流行性乙型脑炎(Japaneseencephalitis，陀)简称乙脑，是由乙型脑炎病毒引起的一种苇要蚊媒 性人兽共患传染病【1j。多种动物易感，蚊是JEV的主要传播媒介，猪是其主要的储存宿主和扩散宿 主。乙脑对猪的危害主要为：妊娠母猪发生流产和死胎，公猪发生睾丸炎，育肥猪持续高热，新生 仔猪脑炎【2l。该病主要流行于东亚和南哑各国，而我国是乙脑发病人数最多的国家。占世界总发病数 的80％以上13J。近年来，乙脑的流行分布范围呈扩大的趋势，乙脑的诊断和防治研究具有重要的公 共卫生学意义。 JEV属于黄病毒科黄病毒属，基因组为正链单股RNA病毒，基因组长度11kb。病毒粒子有3个结 资助项目：国家自然科学基金 作者简介：赵付荣(1983～)，女，河南信阳人，博士研究生，主要从事免疫病理与病毒分子生物学研究 电话：0451 $通讯作者：E—mail：zgb@h州．ac．cn 第四次猪病学术研讨会会议论文集 E蛋白是病毒粒子表面最重要的结构蛋白，其表面的抗原决定簇，具有血凝活性和中和活性。E蛋白与 病毒的毒力、宿主范围、组织嗜性、膜融合、保