结核阳性和阴性牛巨噬细胞感染牛分枝杆菌的表达谱差异分析.pdfVIP

２０１３ 年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会 暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会论文集 结核阳性与阴性牛巨噬细胞感染牛分枝杆菌的 表达谱差异分析 林敬钧，王洋，王进，李华，赵德明，周向梅 （中国农业大学国家动物海绵状脑病实验室，北京 １００１９３） 　 　 摘要：研究目的：牛结核是由牛分枝杆菌感染引起的疾病，对养牛业乃至人类健康均产生很大的影响。 我们之前的研究发现，不同感染状态的牛分离到的单核细胞转化成的巨噬细胞，在进行体外重新使用牛分 ＴＭ 枝杆菌攻毒时，其反应存在差异。 为了研究整个转录组表达的差异，我们使用Ａｇｉｌｅｎｔ 公司的牛基因表达 谱芯片来研究整个过程中转录组的变化。 分别探讨了结核阳性牛的巨噬细胞与结核阴性牛的巨噬细胞的 表达谱差异，以及两种感染状态的巨噬细胞在体外牛分枝杆菌攻毒时发生的表达谱改变。 材料方法：通过 皮内变态反应和γ干扰素ＥＬＩＳＡ 检测方法，对某牛场奶牛结核病感染进行检测，分别采集上述两种方法 检测阳性和阴性的奶牛各５头的外周血，分离了外周血单个核细胞，并培养至其分化成巨噬细胞，使用牛 分枝杆菌按照１０ 比１的感染复数感染巨噬细胞。 感染６小时后，收集巨噬细胞，提取总ＲＮＡ。 经过ＲＮＡ 质检，选择ＲＮＡ总量较高的３头阳性牛以及３头阴性牛进行 ＲＮＡ纯化和基因芯片杂交实验。 使用软件 扫描杂交完成的芯片，提取数据，并对不同芯片进行归一化，从而得到了归一化的数据，并将原始数据上传 至ＮＣＢＩ 的ＧＥＯ（Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｏｍｎｉｂｕｓ）数据库。 结果和讨论：在较高的感染复数（ＭＯＩ等于１０）下，观 察了巨噬细胞在体外感染前后的基因表达变化，发现体外感染导致整个转录组数千个基因的表达发生改 变，也有某些功能不同程度的异常。 比如ＣＳＦ３、ＣＳＦ２和ＣＣＬ２０这三个基因的表达量变化很大，观察到巨 噬细胞的经典激活但是ＩＬ１２ 的表达又不高。 结核阳性牛和结核阴性牛的巨噬细胞的表达谱之间有较小 的差异，不如已报道的使用外周血单个核细胞获得的结果表现出的差异那么大。 具体表现在 ＫＬＫ１２、 ＰＲＳＳ２等基因的变化，以及一个以ＳＰＡＲＣ基因为中心的细胞外基质的基因网络。 而且我们也发现，结核 阴性牛的巨噬细胞在感染牛分枝杆菌后，其基因变化的倍数普遍高于结核阳性牛的倍数，表明健康牛的巨 噬细胞对攻毒的反应更大，而结核阳性牛巨噬细胞再次感染牛分枝杆菌，其反应弱，防御能力差。 主要参考文献： ［１］　 ＲｏｈｄｅＫＨ，ＶｅｉｇａＤＦ，ＣａｌｄｗｅｌｌＳ，ＢａｌａｚｓｉＧ，ＲｕｓｓｅｌｌＤＧ：Ｌｉｎｋｉｎｇｔｈｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｐｒｏｆｉｌｅｓａｎｄｔｈｅｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｓｔａｔｅｓｏｆ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒ⁃ ｃｕｌｏｓｉｓ ｄｕｒｉｎｇ ａｎ ｅｘｔｅｎｄｅｄ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．ＰＬｏＳ Ｐａｔｈｏｇ ２０１２，８（６）：ｅ１００２７６９ ［２］　 Ｍａｇｅｅ ＤＡ，Ｔａｒａｋｔｓｏｇｌｏｕ Ｍ，Ｋｉｌｌｉｃｋ ＫＥ，Ｎａｌｐａｓ ＮＣ，Ｂｒｏｗｎｅ ＪＡ，Ｐａｒｋ ＳＤ，Ｃｏｎｌｏｎ ＫＭ，Ｌｙｎｎ ＤＪ，Ｈｏｋａｍｐ Ｋ，Ｇｏｒｄｏｎ ＳＶ ｅｔ ａｌ：Ｇｌｏｂａｌ ｇｅｎｅ ｅｘ⁃ ｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｓｙｓｔｅｍｓｂｉｏｌｏｇｙ ａｎａｌｙｓｉｓｏｆ ｂｏｖｉｎｅ ｍｏｎｏｃｙｔｅ⁃ｄｅｒｉｖｅｄ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｃｈａｌｌｅｎｇｅｗｉｔｈ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｏｖｉｓ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ２０１２，７（２）：ｅ３２０３４ ［３］　 Ｂｌａｎｃｏ ＦＣ，Ｓｏｒｉａ Ｍ，Ｂｉａｎｃｏ ＭＶ，Ｂｉｇｉ Ｆ：Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｏｆ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓｆｒｏｍ ｃａｔｔｌｅ ｉｎｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｏｖｉｓ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ２０１２，７（７）：ｅ４１０６６ ２３