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第四章 临床微生物学检验 参考书：本次培训班教材，临床微生物学检验（倪语星，尚红主编，人民卫生出版社） 教学方式：示教、操作、提问、讲解等。 总学时：90-100min 第一节 检验流程及相关重点知识 一、分析前 （一）标本采集与运送(参考课件，提问及讲解，3min) 1、掌握细菌学检验标本采集原则 2、微生物检验人员掌握各类标本采集及运送要求，应编写标本采集手册。 3、定期为医护人员培训，鼓励送检有价值的标本（强调提高双份血培养的送检率，减少痰培养的送检率）。 （二）标本验收（操作和提问，2min） 1、标本信息标注清楚、唯一。 2、采集时间、送检时间符合要求。 3、使用无菌封闭容器、无泄漏。 4、标本类型与申请单是否符合。 5、痰标本肉眼外观符合要求，口水、唾液拒收。 二、分析中 （一）生物安全柜的使用及注意事项（参考课件，操作，5min） 1、标本接种应在生物安全柜内进行 2、开机及前窗抬起高度不得高于20mm。 3、注意安全柜内物品的摆放，物品不得挡住前后风口。 4、所有实验材料须距离前窗至少4cm。 5、不能使用明火 6、工作结束，须让安全柜在无物品的情况下运行5min，以清除工作区域内浮尘。然后用75%酒精消毒柜内部和工作台面。最后关闭前窗、紫外消毒30min。 7、标本溢洒的处理 8、注意年检及性能验证 （二）标本的处理和接种（参考课件，操作及提问，5min） 1、培养基的选择：与感染部位可能有什么病原菌有关 2、分区划线保证分离出单个菌落 3、尿液需定量接种 4、无菌体液应离心后取沉渣接种 5、脑脊液、脓液主动做涂片染色 6、选择正确的培养温度、气体环境、培养时间 表1 常见临床标本的处理和接种 临床标本 增菌培养 涂片染色 需氧培养基 血液、骨髓 血培养瓶增菌 阳性报警后革兰染色，必要时可做瑞氏染色 B, C 血管内导管尖端 B CSF 血培养瓶增菌（可选） 离心后革兰染色、墨汁染色（选择）抗酸染色（可选）、接种 B, C 穿刺液 血培养瓶增菌（可选） 离心后革兰染色 B, C 眼、耳、鼻咽拭子 B, C 粪便 怀疑抗生素相关性腹泻时原始标本涂片镜检,特别注意球杆比、葡萄球菌和梭状芽孢杆菌，念珠菌 普通培养：MAC 肠道门诊标本：MAC、碱性胨水、4号琼脂 3、抗生素相关性腹泻： B 痰、气管抽出液、支气管肺泡灌洗液、支气管镜刷子、洗液、 革兰染色镜检 1、判断是否合格。(WBC>25/LP 上皮细胞<10/LP为合格) 2、观察感染的细菌种类、分布。 抗酸染色（可选），六胺银染色（可选），姬姆萨染色（可选） B,C,MAC 组织 革兰染色、抗酸染色（可选） B, C, MAC 尿 B, MAC 定量接种 脓 革兰染色 B, C, MAC 注：G:革兰染色；B: 血琼脂； C: 巧克力琼脂； MAC: 麦康凯琼脂； （三）培养结果观察、处理（操作及讲解，10min） 表2 常见标本培养结果观察及处理 常见标本类型 观察、处理 血液增菌培养 1、两瓶或以上血培养结果阳性，细菌鉴定结果相同，判断为感染菌，做药敏并报告临床。 2、送检两瓶或以上血培养，仅1瓶结果为阳性，且为潜在的污染菌（如表皮葡萄球菌、微球菌、气球菌、草绿色链球菌、棒状杆菌、丙酸杆菌等），一般认作为污染菌。 3、仅送检1瓶血培养，且培养出上述潜在的污染菌，则其临床意义不能确定，需与临床医生讨论其可能的临床价值。 无菌体液标本 有细菌生长（排除污染）即有临床意义，做鉴定药敏，并报告。 痰标本 合格痰标本，在下列情况下有意义，需进一步鉴定和药敏 1、培养与涂片镜检相一致的细菌 2、在第2区有下列细菌大量生长需要进行鉴定和药敏：可疑肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、β-溶血性链球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌、革兰阴性杆菌、真菌等 尿液标本 在下列情况下有意义，需进一步鉴定和药敏 1、革兰阳性球菌，菌落计数>104/ml，革兰阴性杆菌，菌落计数>105/ml，不超过2种菌落。 2、无菌操作下膀胱穿刺尿液只要检出细菌即认为是致病菌。 脓、分泌物标本 数量较多的、≤2种菌落生长，需进一步鉴定和药敏。 常见致病菌有：金黄色葡萄球菌、化脓链球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希氏菌、变形杆菌、真菌。 粪便标本 在麦康凯琼脂上生长的无色、透明的小菌落，考虑为沙门或志贺菌需进一步鉴定和药敏。 在血平板上生长的大量单一的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、念珠菌需要向临床报告。 咽拭子 可疑下列细菌有意义 1、溶血链球菌； 2、金黄色葡萄球菌； 3、大量革兰阴性杆菌 （四）涂片染色镜检（参考课件，操作及讲解，10min） 1、掌握革兰染色、抗酸染色、墨汁染色方法步骤 2、不同镜检方法（染色标本，不染色标本的临床应用） 3、