06发酵工艺与设备提高实验教案.docVIP

淀粉酶的发酵 牛肉膏蛋白胨NaCL、淀粉一 、种子制备 种子培养基配制 LB培养基：牛肉膏1％，蛋白胨0.5％，NaC0.5％，pH7.0左右。 2．培养基的分装及其灭菌 将配好的培养基分装到250ml摇瓶中，每瓶100ml，最后将培养基置于121℃灭菌20min。 3．接种 将已经活化的斜面种子接种到摇瓶中30℃摇床中培养。 4．培养时间及镜检 一般种子培养需要2天左右，然后利用镜检来检测培养过程是否染菌。 二 发酵过程控制 1．发酵培养基配制 LB培养基：牛肉膏1％，蛋白胨0.5％，NaCl0.5％，pH7.0左右。 2．培养基灭菌 将配好的培养基装到中，121℃灭菌20min。 3．接种 将已经培养好的种子接种到中30℃培养。 4．观察和取样 观察发酵过程中是否存在异常情况，如发酵液颜色、气味是否异常等情况。每h取样一次，每次10ml左右。 5．时间及镜检 需要1天左右，然后利用镜检来检测培养过程是否染菌。 三发酵过程中生理生化指标的检测 1．pH变化曲线测定 用比色法测定生长曲线 将每批次的样品（5－10ml）在OD600的条件下比色，以培养时间为横坐标，OD值为纵坐标，得到曲线。 四 淀粉酶效价测定 培养基配制淀粉培养基 2％淀粉，2％琼脂 2. 水解淀粉圈实验 用打孔器在平皿中央打孔，取0.1ml不同时间取样的发酵液于孔中，最后将平皿放置于300C左右培养箱中培养并观察。pH-DO-t（时间）曲线.绘制生长曲线青霉素的发酵 玉米浆蔗糖硫酸铵碳酸钙硫酸亚铁磷酸二氢钾无水硫酸钠硫酸锰牛肉膏蛋白胨NaCL、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌 （一 、种子制备 种子培养基配制 培养基的组成（％）：玉米浆3.8，蔗糖2，硫酸铵0.2，碳酸钙0.1，硫酸亚铁0.02，pH 4.7～4.9。 2．培养基的分装及其灭菌 将配好的培养基分装到250ml摇瓶中，每瓶60ml，最后将培养基置于121℃灭菌20min。 3．接种 将已经活化的斜面种子接种到摇瓶中25℃摇床中培养。 4．培养时间及镜检 一般种子培养需要天左右，然后利用镜检来检测培养过程是否染菌。 二 发酵过程控制 发酵培养基配制 培养基的组成（％）：玉米浆4，蔗糖1，磷酸二氢钾0.5，无水硫酸钠0.5，碳酸钙0.07，硫酸亚铁0.018，硫酸锰0.0025，pH 4.7～4.9。 2．培养基及其灭菌 将配好的培养基装到中，121℃灭菌20min。 3．接种 将已经培养好的种子接种到中25℃发酵。 4．观察和取样 观察发酵过程中是否存在异常情况，如发酵液颜色、气味是否异常等情况。每1h取样一次，每次10ml左右。 5．时间及镜检 需要4天左右，然后利用镜检来检测过程是否染菌。 三 发酵过程中生理生化指标的检测 利用称重法测定生长曲线 将每批次的样品（5－10ml）离心后称重，测得不同时间菌体的质量，以时间为横坐标，质量为纵坐标，得到曲线。 测糖 利用DNS法，测定每批次的样品（5－10ml）离心后的发酵液的还原糖的含量，以时间为横坐标，含量为纵坐标，得到曲线。 四 青霉素效价测定（利用抑菌圈的实验方法测定青霉素效价） 1.培养基配制LB培养基 2.指示菌的培养 选取指示菌金黄色葡萄球菌、枯草杆菌接种到灭过菌的液体培养基中，在300C左右培养24－36h。 3.抑菌试验步骤 a.取0.2ml培养好的指示菌于平皿中，每种菌做2－3个平行样。 b.用涂棒将指示菌在平皿中涂布均匀。 c.用打孔器在涂布均匀的平皿中央打孔。 d.取0.1ml不同时间取样的发酵液于孔中。 e.最后将平皿放置于300C左右培养箱中培养并观察。 pH-DO-t（时间）曲线生长曲线.绘制残糖变化曲线； 4.绘制青霉素效价（透明圈直径表示）变化曲线