ELISA法在不同二噁英含量级别样品监测中应用.pdfVIP

持久性有机污染物论坛2011 暨第六届持久性有机污染物全国学术研讨会论文集 ELISA 法在不同二噁英含量级别样品监测中的应用 Application of ELISA for Total TEQ Monitoring of Samples with Different Dioxin Concentration Level 1 1,2 3 孟博 , 李一凡 , Ching Lo (1 哈尔滨工业大学市政环境工程学院, 城市水资源与水环境国家重点实验室, 国际持久性有毒物质 联合研究中心, 哈尔滨, 150090；2 加拿大环境部科学技术局,加拿大,多伦多 M3H5T4 ； 3 加拿大安大略省环境部,加拿大,多伦多, M9P3V6) 1. 引言 二噁英类化合物的检测是现代化合物检测的重点和难点，国际公认的二噁英标准检测方法是 高分辨气象色谱-质谱法（HRGC-HRMS ）。其中美国 EPA1613B 为各国公认的二噁英检测“金标 准”[1] ，但检测费用高，样品前处理繁琐，检测周期长，制约着这一方法在二噁英环境批量检测 中的应用。而免疫方法具有灵敏度高、操作较简单、费用低、耗时少，在环境样品检测中有着较 好的应用前景。本文采用 CAPE 技术高效二噁英/呋喃免疫试剂盒，使用快速萃取净化方法和修 正的 EPA4025 方法对土壤和底泥样品中二噁英类物质含量进行检测，并与 HRGC-HRMS 结果进 行比对分析。 2. 材料与方法 2.1 样品与试剂 ELISA 试剂盒（CAPE ），农残级正己烷、二甲基甲酰胺(DMF)、丙酮、甲苯、甲醇、正十四 碳烷，无水硫酸钠，2,3,7,8-TCDD 标准品。 2.2 仪器 450nm 波长色度计(Abraxi ），氮吹仪、微量移液器、连续分液器（Eppendorf ）、离心机、漩 涡振荡器、样品旋转器、电子天平。 2.3 方法 将土壤样品和底泥样品各称量 5g 后装入样品瓶中，分别采用快速萃取净化法[2]和 4025m 法 对样品进行萃取和纯化。其中土壤样品采用 DMF 溶剂进行萃取，经发烟硫酸氧化后的样品在 50℃干热条件下氮吹后待测。而底泥样品采用 EPA4025m 法，经 1：1 正己烷：丙酮萃取后，选 择适量样品经多层硅胶柱过滤后收集到碳柱中，再利用甲苯进行洗脱，在 70℃干热条件下经氮 吹后待测。 含有抗体的 ELISA 试管应提前一天放置于室温下，实验首先将每个试管加 5mL 灭菌的去离 子水，5 分钟后倒去水，加入 500uL 样品稀释液。分别加入不同浓度的标准液于 ELISA 试管 中。同时用甲醇溶解待测样品及空白样、加标空白样、标准样品，并加入到试管中。室温避光下 孵育 2 小时，后弃去溶液并反置敲打于滤纸上，经漂洗液清洗 4 次后加入 500uL 竞争性抗原溶 液，孵育 20min 后倒掉溶液，用灭菌的去离子水冲洗 4 次。加入底物后室温孵育 40min ，结束后 再加入 500uL 终止液，立即在 450nm 波长下测得样品的 OD 值。 采用 CAPE 提供的计算公式及 excel 表格计算获得样品的总 TEQ 值。 3. 结果与讨论 3.1 测定结果 21 持久性有机污染物论坛2011 暨第六届持久性有机污染物全国学术研讨会论文集 本实验对不同含量的二噁英样品的检测方法进行比对分析，并与高分辨气象色谱-质谱 （HRGC-HRMS ）所测得的结果进行对照。其中土壤样品为采自 Pringle Creek, Ontario 是二噁英 高浓度样品其浓度为 1300pgTEQ/g ；底泥样品为 CRM 二噁英较低浓度样品，其浓度为 50pgTEQ/g 。实验结果见表 1。 表 1. ELISA 测定结果与 HRGC/HRMS 测定结果比较 样品 ELISA 测定结果 HRGC/HRMS 测定结果 相对误差 土壤 1480 pgTEQ/g 1300 pgTEQ/g