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第九届全军蠢行囊学·第八屠全军舫生物危害医学专业学术会议论文集
乙型肝炎病毒基因在宫内传播中的选择性
苏海曩。张玉海2李靖’张叠。卢蛹’闰永平‘
‘第四军医大掌军事预防医学系液仔瘸教研宝西安710032
2繁圈军医大学军事及髓医学系卫生统计qttt研宣西安710032
HBV的宫内感染由于不能被乙肝疫苗和乙肝免疫球蛋白有效的阻断，一直是乙肝慢性携
带者形成的重要原因。既往研列嘲表明，母体中HBV
DNA的高浓度以及HBeAg阳性等是
HBV富内感染的高危因素，但具有危险因素的孕妇不一定发生富内感染，而不具有危险因素
的孕妇也会发生宫内感染。而且有研究I刎表明发生垂直传播的新生儿体内的HBV序列和母体
的序列存在一定的差异。本研究透过分析4对发生宫内感染的新生儿及其母亲的序列，探寻
同一母体内的多株IIBV序列在发生宫内传播时，是否存在基因方面的选择优势。
1材料和方法
1．2kb或2．5kbDNA阳性的新生儿宫内感染者及其母
妇及其新生儿。筛选HBsAg阳性、HBV
h内、未注射HB疫苗
亲共4对(MA-MD,NA-ND)，血清取自孕妇肘静脉血和新生儿生后24
和HBIG时的股静脉血，保存于-80C。
1．2宫内感染的判定： DNA为阳性，
新生儿出生后24h内外周血HBsAg阳性和／或HBV
判定为寓内感染的发生。
采用ELISA法检测，操作按照试剂盒说明书进行。
1．3血清HBsAg和l-lBeAg的检测：
检测结果用MultiskanMK3酶联免疫检测仪判定，M眨2．1为阳性，P刷2．1为阴性。
1．4血清HBVDNA的提取
1．5 2．5
PCR引物和测序引物：Pl、P2朋于扩增HBVkb基冈组，P3、P4扩增1．2kb片断。
引物S1．S5用于HBV2．5
特异引物(表1)。
PCR
表l 0I物和测序弓l物
1．6PCR参数
1．6．1 2．5kb PCR min后开
PCR采_H】Hight-fidelitySystem，循环参数为：94C预变性5
始循环，94℃45S，60℃lmin，72℃4rain(增加5
S，循环)，共40个循环，最后72℃延伸
10min。
1．6．2 1．2kb PCR min后丌
PCR采用Hight—fidelitySystem，循环参数为：94C预变性5
45 l 2 rain。
始循环，94CS，55Cmin，72Cmin，35个循环，最后72C延仲5
第九届全军流行病学·第八届全军防生物危害医学专业学术会议论文集
1．6．3对照的设置每轮PCR均设阳性对照、阴性对照和空白对照。阳性对照为HBsAg、
DNA均阳性的乙肝病人血清；阴性对照为正常人血清及无菌水，阳性、阴性对
HBeAg、HBV
照均与实验标本一起进行模板提取及DNA扩增全过程。在PCR反应体系中以无菌水代替模
板，作为PCR过程的空白对照。
kb
kb和1．2PCR产物，回收后
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