扇贝生物抗病功能基因的克隆表达与应用.pdfVIP

2004青岛·全国水产养殖研讨会论文集 扇贝生物抗病功能基因的克隆表达与应用 宋林生 中国科学院海洋研究所青岛266071 摘要随着海洋环境逐渐恶化和养殖的规模化发展，病害问题已经成为目前严重制约贝类养殖业健康 发展的主要障碍，世界各海洋大国对此给予了高度重视，围绕养殖环境、病原以及养殖技术等方面开展了大 量的研究工作，提出了许多防病治病措施，也取得了一定的成效。但从长远角度考虑，我国扇贝养殖业健康可 持续发展的有效途径则是抗病品种或品系的选育以及高效、无毒、广谱新型药物的开发和研制。扇贝中抗病 基因的克隆和表达无疑是研究和开发新型天然抗菌物质以取代化学农药和抗菌素的新途径，同时也是研究扇贝 免疫防御机制、提高机体抗病力、实现遗传改良，选育抗病品种的基础和关键。本文综述了我们在扇贝生物 抗病功能基因的克隆表达与应用方面的研究进展。 一、贝类养殖业面临的困境 扇贝是我国海水养殖的主要贝类品种，从20世纪80年代后，扇贝养殖发展迅速，养殖产量在1996—1997 年曾一度达到百万吨。但是从1994年以来，养殖扇贝开始出现死亡现象，，并于1997年暴发了栉孔扇贝的大 规模死亡，经济损失十分惨重。面对日益严重的养殖栉孔扇贝病害问题，目前尚没有十分有效的解决办法， 扇贝养殖业的健康和可持续发展正遭受严重威胁。扇贝病害防治的主要困难在于：(1)养殖扇贝在不同的发 育阶段对特异性病原的易感性不同；(2)不同发育阶段病原不同，病原的致病机理也不同；(3)扇贝作为无脊 椎动物缺乏特异性免疫系统，无法使用特异性免疫学防治方法。在育苗期间大量使用抗菌素或化学农药是目 前育苗和养殖单位普遍使用的应急措施，而抗菌素和农药的滥用势必会造成各种病原耐药性的提高，从而又加 大了病害防治的难度。另外，随着育苗用海水的排放，残留的农药和抗菌素对环境也造成了严重污染，其后 果是不堪设想的。养殖扇贝疾病的不断出现以及各种疾病病因的多样性迫切要求研究新的疾病防治措旌，开 发新型的抗菌物质或处理方法。 二、抗病功能基因研究现状 目前的研究结果表明无脊椎动物中没有特异性免疫系统，只存在原始的非特异性免疫系统。在缺乏特异 性免疫机制的情况下，无脊椎动物依赖非特异性免疫来防御各种各样病原的感染，维持机体的健康和正常的生 命活动，从而保证了无脊椎动物界的繁荣。目前，人们普遍认为无脊椎动物的防御系统包括细胞免疫和体液 性免疫。细胞免疫主要是指血淋巴中血细胞对异物的吞噬、杀灭和排除作用。体液性免疫主要包括血淋巴的 ， 溶菌作用、凝集作用、溶血作用等。体液性免疫因子包括n淋巴中的各类抗菌因子、抗病毒因子、血凝因子、 细胞激活因子、识别因子、凝聚素、溶血素、调理素及溶菌酶等各种具有免疫活性的酶类。这些免疫因子的 作用在于识别异物；通过凝聚、沉淀、包裹、溶解等方式抑制病原体的生长及扩散，或者直接将其杀灭并排 出体外；发挥调理作用，促使血细胞更易于吞噬外来异物：另外还可以参与止血、凝固、物质吸收与运输以 及创伤修复等生理作用。 从比较免疫学的角度来看，贝类是目前免疫学研究最为深入的无脊椎动物类群之一，研究结果主要集中于 2004青岛·全国水产养殖研讨会论文集 双壳纲和肺螺亚纲中有限的几个代表种，这些种一般具有重要的经济价值(如贻贝、牡蛎)或医学价值。随着 分子生物学技术的发展和不断完善，从海洋无脊椎动物中分离克隆参与抗病防御的功能基因已成为国际海洋生 物技术发展的一大热点，开发利用这些抗病基因也是该领域的一大发展趋势。目前，已有多种参与免疫防御 的抗病基因相继得到了克隆，其中抗菌肽或抗菌蛋白是研究最多的抗病因子。抗菌肽或抗菌蛋白是生物界普 遍存在的一种宿主防御机制，从细菌、原生动物、无脊椎动物、脊椎动物到植物都有报道。作为非特异性免 疫因子，抗菌肽的优点在于它们具有广谱抗菌活性，在感染后会很快合成，并且可以大量储藏。体内实验表 明大部分抗菌肽对机体内那些对常规抗菌素有抗性的微生物表现出明显的杀伤活性，并且这种杀伤作用快速无 特异性，作为新型的治疗药物，这类多肽已经引起了人们的普遍关注。在已发现的抗菌肽中，50％是来自无脊 椎动物，其中研究最多和最早的是昆虫，目前在昆虫中已经发现了170多种抗菌肽或抗菌蛋白，其中一些抗 等人将抗菌肽基因转入烟草，在烟草中不但检测到抗菌肽的表达且表现出明