整合PRRSV+GP5囊膜蛋白的假型鼠白血病病毒的构建.pdfVIP

猪的传染病 组病毒中，目前我们还在做进一步的验证。 PRRsv属于套式病毒目，动脉炎病毒科的成员诩，目前关于套式病毒的转录中的非连 续性跳跃是发生在负链的合成中，还是发生在正链的合成中，尚存在争议【4l。本研究发现， EJⅢ 拯救的突变病毒亚基因组中的Leader-B0dyiunction序列来源于BodyTRS，与Sniider 在EAv中的研究结果一致，这为大部分人支持的非连续性跳跃发生在负链的合成中的观点 提供了直接证据。并且，通过对重组病毒vCPv基因组及亚基因组序列分析发现，利用PRRsv oⅪ鬯本身fⅡ峪转录的s删A2．t中含有的PCV序列与其基因组含有的PCv序列一致， 这可能暗示着Pm塔v的复制和转录过程是不分开的； 参考文献略 整合PRRSVGP5囊膜蛋白的假型鼠白血病病毒的构建 夏平安“t党占固’，周斌2，王臣l崔保安1。陈霹言2 (1．河南农业太学，郑州，4如002；2．南京农业大学，南京，210095) 摘要通过反转录·聚台酶链式反应(RnPcR)扩增了PRRsvGP5，GP谌固并进行了克隆与鉴定．构建 两种质粒pHll邯和pHITIIl瞬时共转粢人胚肾钿293t48h后收集假病毒上清。将假病毒上清超速离心后 用抗PRRsv的多抗通过wes￡cm·bJ0t证明G”蛋白能够在饭藕毒颗粒表面表选，表明GP5能够整合到此病毒 粒子裹面，用其感襄宿主知胞，48小时后x母AL细胞染色发现有效基因l∞2能有鼓表达，证实构建的PRRsv 假病毒有感染性．本研究成功构建了MIlL、，．G”假病毒体乐，为研究PRRsv侵入细胞的机理及其组织嗜性 的变异奠定基础，并且可能发展为一个没有生物危害在研究病毒八侵动物感染上的强有力的工具． 关键词PRRsv。GP5基因，鼠白血病病毒，假病毒 猪繁殖与呼吸综合征(PRRs)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRsv)引起的一种以 母猪繁殖障碍和新生仔猪呼吸道症状为特征的传染病。该病首先爆发于美国．现已传播到世 界各地，给世界养猪业造成了巨大的经济损失。PRRS现已成为危害我国养猪业发展的重要 疫病之一。PRRS流行病学非常复杂，PRRSV急性感染后可引起长期的持续性感染，猪场一 旦污染该病后很难净化。 PRRSV是一种含有囊膜当前无法治疗的RNA病毒，在分类上属于动脉炎病毒科动脉炎 oRFlb)编码病毒RNA复制酶，0RF2、3、4、5编码病毒囊膜蛋白，ORF6、7分别编码病毒 主要结构蛋白M蛋白、N蛋白。 囊膜糖蛋白GP5是PRRsv诱导产生保护性中和抗体的主要抗原结构蛋白，其编码基因 长度约603bp，编码约201个氨基酸残基。在PRRsv感染的巨噬细胞和干细胞中’GP5可以 诱导细胞凋亡．此外，该蛋白可能引起PRRsv的ADE作用．但是它和体内发病机制的相关性 还不明确． 假型病毒(pseud吣供vimS)是人们利用现代生物技术手段合成的一种病毒，是指一种病 毒拥有自己的遗传物质，而遗传物质却有另一种病毒的囊膜糖蛋白包被，因而具有了另一种病 毒的感染特征，既安全又能模拟真病毒的感染特征，它的应用减少了活病毒在实验室的使用， 在研究病毒感染分子机理及病毒药理方面显出巨大威力。目前，成功研制病毒假型系统很多， 但主要是以鼠白血病病毒(MLV)或人的免疫缺陷病毒．1型载体为基础所构建的反转录病毒 假型系统。该系统含有复制不完备的的基因组．其编码病毒囊膜糖蛋白的基因(env)可以 被异源病毒的env基因所取代，在包装细胞系中被包装成假型病毒，这些假型病毒可获得异 源病毒的宿主范围。因为在感染的早期，例如受体结合，细胞膜融合、侵入都是有病毒 的囊膜蛋白质单一确定。目前，利用病毒假型技术研究高危险病毒(如sARs冠状病毒，埃博 拉病毒，丙肝病毒，禽流感病毒等)囊膜糖蛋白的功能作用的报道很多，但还未见利用病毒假 型系统研究PRRsV囊膜糖蛋白的功能作用的报道，所以用假型病毒来研究PRRsv囊膜糖蛋 白与病毒组织嗜性的关系及糖蛋白结合受体的特性．无疑是一种良好的方法。因此本研究通 270 中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会 细胞的机理奠定了基础。 1材料与方法 1．1载体、菌种、细胞与重组质粒 宿主菌DH5a由南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫开放实验室保存．PRR