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口腔研究研究报告 姓名某某某 以提高工作效率，贴近实际工作需求为目标，拟对部门现有流程进行优化与改进方案。 研究背景 研究内容 研究方案 研究资料 1、口腔环境是动态变化的。口腔中的平均温度为37℃，但局部地区的温度并不完全相同，在黏膜表面和人工修复的牙冠上，过冷或过热的饮食就可使局部温度呈现较大幅度的变化。如在吃冰淇淋时，与冰淇淋接触的表明呈-5摄氏度，而和热饮料、吃火锅时，与其接触的表面温度可迅速上升至55摄氏度左右。几秒内表面温度差几乎为60摄氏度。事实证明口腔菌丛，尤其是黏膜表面和龈上菌斑中的细菌短时间内能够经受得住如此大幅度的温度变化。 2、变形链球菌是公认的主要致龋菌，变形链球菌UA159全基因组测序已在2002年完成。全基因组测序的完成使得变形链球菌全基因组芯片成为可能。 研究背景 3、细菌的生长增殖受其生存环境的影响，在不同的环境中细菌的代谢会产生变化，表现为细菌所表达的蛋白质的质和量发生变化。目前，蛋白质组学是研究细胞表达蛋白质组变化的最有效的技术平台，其中双向电泳及电泳图谱分析是最常用的基本研究手段，运用质谱分析和同位素标记等技术则可对感兴趣的蛋白质进行深入细致的研究。 4、待补充，空一页 研究内容 1、 2、 3、 相关研究资料 1、Suzuki等采用转录组学和蛋白质组学方法，对一株蓝细菌(Synechocystis sp．PCC6803)的热休克反应进行了系统研究。当培养温度转化为44℃后20 min，使用DNA芯片检测的结果表明，一些分子伴侣及蛋白酶的编码基因(例如groESL1、groEL2、htpG、 hspA)开始被诱导转录；60 min后，用双向电泳检测，发现这些分子伴侣及蛋白酶的表达水平也有升高，与芯片结果相吻合。 The heat shock response of Synechocystis sp. PCC 6803 analysed by transcriptomics and proteomics. 2、对普通脱硫弧菌(Desulfovibrio vulgaris)热休克反应的研究中，应用双向凝胶电泳方法发现DnaK、HtpG、HtrA、AhpC等热休克蛋白表达水平的变化与芯片结果一致。 Global analysis of heat shock response in Desulfovibrio vulgaris Hildenborough. 3、有学者用双向电泳观察了变链在多种环境应激下的蛋白质表达，发现变链在受到氧化、酸、饥饿、高渗透压和热应激后，有30-89 种蛋白质表达水平改变，有些蛋白表达水平在各应激反应中均改变， 称为普遍性应激蛋白，其他的则在一个或某几个条件下的应激反应中变化，称为特异性应激蛋白。 Chia 等用差异显示RT- PCR 检测变链在环境应激下的基因表达水平，发现类似的基因表达变化。 研究方案 （一）变形链球菌UA159不同生长阶段和不同条件下耐热性的差异 对不同时期不同PH条件下的菌株进行热应激，筛选热应激性能优良的菌株 （二）选取耐热性强菌株进行热适应条件和致死评价条件摸索 1、在不同温度下水浴锅中处理细菌30min，分别活菌计数，确定热适应和致死评价温度范围 2、按照1中所确定的温度，将菌液在该温度下热适应处理30min，对照置于37摄氏度培养30min 3、计算对照管和测试管菌体的存活率，通过比较两者的存活率来选择最佳的热适应温度 存活率=评价前活菌数/评价后活菌数×100% 耐热性提高倍数=热适应组存活率/对照组存活率 （三）DNA微阵列分析 目的：利用基因芯片技术筛选热应激后变形链球菌中差异表达的基因。 方法：构建变形链球菌基因表达谱检测芯片，利用基因芯片技术筛选不同温度下变形链球菌差异表达的基因，以观察温度对变形链球菌基因表达的影响。 1、芯片制备 2、细菌总RNA提取及纯化 采用TRIzol试剂盒分别提取两组标本中的总RNA 使用QIAGEN Raeasy Kit 分别纯化总RNA 将两组标本中的总RNA等量完全溶解于Mili-Q水中，-80℃冻存待用 3、探针标记 cRNA标记与合成运用逆转录法荧光标记提取的样 本RNA，各组均用Cy3单标标记。 4、芯片杂交和洗涤 cRNA样品片段化及芯片杂交 5、数据分析 芯片杂交结果采用Agilent G2565AA荧光扫描仪进行扫描，Feature Extraction软件读取，扫描仪分辨率为5m，光电欧联管分别设置为10