左归丸含药血清通过ERKSmads信号通路干预MC3T3-E1细胞的功能基因表达.pdfVIP

· 872 · 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBulletin 2012Jun；28(6)：872—6 网络 出版时间：2012-5—1114：04 网络出版地址 ：http：／／www．cnki．net／kcms／detail／34．1086．R1404．021206．872_031．html 左归丸含药血清通过 ERK／Smads信号 通路干预MC3T3-E1细胞的功能基因表达 蒿长英 ，任艳玲 ，赵金茹 (辽宁中医药大学 1．基础医学院、2．实验中心，辽宁 沈阳 110032) doi：10．3969／j．issn．1001—1978．2012．06．031 的成骨前体细胞系MC3T3．E1Subclonel4作为研究 文献标志码 ：A 文章编号：1001—1978(2012)06—0872—05 对象，进一步探讨ERK／Smads信号通路在左归丸防 中国图书分类号：R．332；R289．5；R329．24；R394．2；R681．053．1 治骨质疏松症中的机制。 摘要：目的 研究ERK1／2信号通路在左归丸含药血清调控 1 材料与方法 MC3T3．E1细胞基因表达中的作用。方法 以倍美力为阳性 1．1 实验动物 SPF级SD 早大鼠154只，体质量 对照药，对SD 大鼠灌服高、中、低剂量的左归丸混悬液，d 180～200g，购于上海西普尔-必凯，许可证号码： 7腹主动脉取血分离含药血清。采用 M13法检测左归丸含 SCXK(沪)2008-0016，合格证编号：2008001606310。 药血清和PD98059对MC3T3-E1细胞增殖作用的影响，采用 MC3T3一E1Subclone14，由中科院上海细胞库提供。 Westernblot法检测 ERK1／2蛋白的磷酸化水平及 TGF一131、 1．2 主要药物和试剂 左归丸 (成分：熟地黄、菟 Smad4蛋白表达 ，采用RealTimeRT—PCR法检测 cbfal、COL ImRNA表达。结果 左归丸含药血清和倍美力能促进 丝子、牛膝、龟板胶、鹿角胶、山药、山茱萸、枸杞子； MC3T3-E1细胞增殖 ，诱导 ERK1／2蛋 白的磷酸化，促进 上 海 雷 允上 封 浜 制 药 有 限公 司；国药 准 字 TGF一311、Smad4蛋 白分泌，上调其 Cbfal、COLImRNA表达； ；倍美力结合雌激素片 (爱尔兰惠氏药 加入PD98059后 MC3T3一E1细胞增殖下降、ERK1／2蛋白的 厂，批号 0904018)；改 良型 -MEM 培养液 (Hy— 磷酸化水平降低、TGF．3[1蛋白表达进一步升高、Smad4蛋白 clone)；胎牛血清 (FBS)(Hyclone)；胰酶、MTI、 表达降低、cb 1、COLImRNA表达下调。结论 左归丸能 PD98059(Sigma)；抗 ERK1／2抗体、抗 p-ERK1／2 有效促进成骨细胞增殖和分化；左归丸可能是通过发挥雌激 抗体 (CellSignalingTechnology)；anti—TGF一131、anti— 素样作用调控了ERK／Smads信号通路 ，从而达到防治骨质 Smad4抗体 (SantaCruzBiotechnology)；RealTime 疏松 的 目的。 RT—PCR试剂盒 (TaKaRa，Code：DRR047，DRR820)； 引物委托T