生理生化综合试验报告.docVIP

《植物生理生化实验》综合性实验总结 （2010 — 2011）学年第一学期 课程：《植物生理生化实验》—生化实验21学时 成绩： 学院： 林学院 专业： 林学 年级： 2009级 学号： 090410154 姓名： 黄泉妹 综合性实验报告 NaCl 溶液浸种对水稻种子萌发过程若干生化指标的影响 面向专业 09级农学、植保、农资、园艺、设施、茶学、林学、水保、制药、生安 本项目学时 14学时（总学时45） 实验内容简介 本综合项目以水稻种子为材料，分别用蒸馏水、60mol/L NaCl溶液浸种→催芽→测定不同处理的发芽种子的游离氨基酸、可溶性蛋白质、淀粉酶和同工酶项目。实验要求：掌握分光光度计、离心机、电泳仪等仪器的使用方法以及电泳技术的基本操作、标准曲线的制作，并综合分析NaCl浸种胁迫对水稻种子生理特性的影响机制。 综合性实验总结报告： 60mol/LNacl溶液浸种对水稻种子萌发过程若干生化指标的影响 摘要：研究并比较清水生长的水稻种子和60mol/LNacl溶液胁迫种子萌发的水稻种子中游离氨基酸和可溶性蛋白质含量的差异及淀粉酶和同工酶含量及活力的不同。结果表明：用60mol/LNacl溶液浸泡的水稻种子中可溶性蛋白质和游离氨基酸的含量比清水浸泡的水稻种子的含量要低；60mol/LNacl溶液浸泡的水稻种子中氧化物同工酶和淀粉酶的活性比清水浸泡的水稻种子的活性要低。研究结果说明：60mol/LNacl溶液的胁迫对种子的萌发和生长有抑制作用。 关键词：清水浸泡的水稻种子、60mol/LNacl溶液浸泡的水稻种子、游离氨基酸、可溶性蛋白、淀粉酶、同工酶 引言： 盐胁迫是影响植物生长、降低作物产量的不利因素之一；据估计，我国盐渍化土壤面积约2700万平方千米，并且还有继续增长的趋势；种子萌发是植物整个生命中的关键，所以研究盐胁迫的种子中游离氨基酸和蛋白质的含量，以及对种子中淀粉酶和同工酶产生的影响，还有对种子萌发过程中若干生化指标的影响因素的研究是至关重要的。 一、材料与方法 1.1材料：清水浸泡的水稻种子、60mol/LNacl溶液浸泡的水稻种子 1.2方法 1.2.1植物组织中可溶性蛋白质含量的测定 用Folin—酚试剂法，在碱性下蛋白质的肽键与铜结合生成紫红色的蛋白质—铜络合物；络合物及蛋白质中酪氨酸和某丙氨酸等芳香族氨基酸残基使磷钼酸—磷钨酸试剂还原，产生磷钼蓝和磷钨蓝的深蓝色混合物，一定条件下，颜色深浅与蛋白质含量成正相关，利用650nm波长的特性吸收进行比色测定。 1.2.2植物组织中游离氨基酸总量的测定 游离氨基酸与茚三酮共热时生成二酮茚—二酮茚胺，该产物成蓝紫色，在一定范围内吸光度与氨基酸溶度成正比，即可用分光光度法测定其含量。 1.2.3植物过氧化物酶同工酶测定 利用过氧化物酶催化双氧水（H2O2）分解并把联苯的溶液染色，出现的蓝色或棕褐色条带即为过氧化物；苯胺氧化成蓝色或棕褐色产物原理：将电泳后的凝胶置于含有双氧水（H2O2）及联苯胺的溶液中染色，出现的蓝色或棕褐色即为过氧化物酶同工酶在凝胶中存在的位置，多条有色带构成过氧化物酶同工酶酶谱。 1.2.4淀粉酶活性的测定 淀粉酶包括α—淀粉酶、β—淀粉酶，采用加热钝化β—淀粉酶，测出α—淀粉酶的活力，再与非钝化条件下测定总活力（α+β）比较，即算出β—淀粉酶的活力。 二、实验结果分析 2.1植物组织中可溶性蛋白质含量的测定 由实验数据可知：用60mol/LNacl溶液浸泡的水稻种子中可溶性蛋白质含量低于用清水浸泡的水稻种子。造成误差的可能原因：在研磨水稻种子时没有加入石英砂或者太少使得研磨不够充分；在加入甲液后未置于30℃下放置10min；取量标准溶液时出现体积误差。 2.2植物组织中游离氨基酸总量的测定 由实验数据可知：用60mol/LNacl溶液浸泡的水稻种子中游离氨基酸的含量比清水浸泡的水稻种子的低，且OD值大的样品呈现的蓝紫色就更深，试验中出现的误差可能是：研磨不够充分、迅速；试剂的用量控制不够精准；过滤不充分；加热时间不足。 2.3植物过氧化物酶同工酶测定 由实验数据可知：用60mol/LNacl溶液浸种的水稻种子比清水浸泡的种子的色带疏及颜色浅。实验的关键：安装玻璃夹心槽应严密，加胶后应及时覆盖水层，防止氧化；电泳过程应严格控制好电压与电流的大小。 2.4淀粉酶活性的测定 由实验数据可知：用60mol/LNacl溶液浸种的水稻泡子中淀粉酶活力低于用清水浸泡的水稻种子中淀粉酶的活力。误差分析：在加入1%淀粉溶液时，各试管应尽量同步进行；并准确控制好水浴加热的温度和时间；9支试管在显色反应时应同时放入100℃