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反义核酸诱导治疗白血病的研究进展 　　作者：李建厂,综述,徐酉华,审校　　作者单位：重庆医科大学附属儿童医院，重庆 400014 　　【摘要】反义技术是近年发展起来的一门治疗肿瘤的新技术，已成为医学界研究的热点之一，许多反义药物已开始进入临床实验阶段，并取得了令人满意的疗效。文章主要综述了反义技术的作用机制，在白血病方面所选用的靶基因以及研究进展。 　　【关键词】 反义核酸　白血病 　　肿瘤细胞因其自身的生长特性而有一些特异表达的基因，这些基因在正常细胞不表达或表达程度很低，因而针对这些基因的反义药物在治疗肿瘤时对正常组织不产生或仅产生较小的副作用。目前选择的抗肿瘤反义药物的靶点主要有：①癌基因类：c?鄄myc、c?鄄myb，bcl?鄄2，N?鄄Ras，K?鄄Ras，H?鄄Ras，c?鄄un，c?鄄fos，cdc?鄄2，c?鄄mos等。②宿主基因类：如多药耐药基因、细胞周期素、前胸腺素、T细胞受体、表皮生长因子受体、蛋白激酶C等。③细胞因子类：如IL?鄄2，IL?鄄1Α，IL?鄄1Β等[1]。在白血病方面，被研究的基因主要有以下方面。 　　1　癌基因类 　　1.1　Bcl?鄄2 　　目前的研究已表明：bcl?鄄2基因是一个耐药和抗凋亡基因。bcl?鄄2蛋白表达的高低与肿瘤细胞对多种化疗药物敏感性密切相关，bcl?鄄2基因的过度表达可明显降低化疗药物引起的细胞凋亡。Zhang等[2]将三氧化二砷与bcl?鄄2的反义寡核苷酸联用，作用于K562和NB4细胞，结果发现反义寡核苷酸能明显促进白血病细胞系对三氧化二砷的敏感性。 　　Bcl?鄄2的过表达被认为是白血病耐药、预后差的重要原因之一，那么，降低bcl?鄄2的表达，则可部分逆转其耐药，增加缓解率。根据这一设想Marcucci等[3]利用bcl?鄄2反义寡核苷酸药物G3139进行了临床实验，病人共20例，包括难治及复发的急性淋巴细胞白血病和急性髓细胞性白血病。采用G3139与氟达拉滨、阿糖胞苷及粒细胞集落刺激因子联合用药，9例病人对治疗有反应，其中6例取得完全缓解，3例部分缓解;在12例可评价的病人中，9例bcl?鄄2 mRNA水平下调，此项研究证实，bcl?鄄2反义寡核苷酸能够在治疗白血病中起到积极作用。已有研究证实，针对bcl?鄄2 mRNA翻译起始部位的反义寡核苷酸(AS?鄄ODN)可抑制许多肿瘤细胞中bcl?鄄2的表达，促进细胞凋亡，提高肿瘤细胞对化疗的敏感性[4]。 　　1.2　Bcl?鄄xL 　　Bcl?鄄x mRNA前体经过不同的剪接可产生两种不同的mRNA，表达产物分别为抗凋亡的Bcl?鄄xL和促凋亡的Bcl?鄄xS。近来的一些研究报道提出凋亡抑制蛋白Bcl?鄄xL和许多常见恶性肿瘤的化疗耐药有密切关系。在体外转染针对Bcl?鄄xL基因的ASODN以后，能够诱导多种恶性肿瘤细胞凋亡，或促进其对化疗药物的敏感性。 Broome等[5]进行了Bcl?鄄xL的反义寡核苷酸作用于急性T淋巴细胞性白血病细胞系CEM的研究，经反义寡核苷酸干预18h后，与对照组相比，CEM细胞的Bcl?鄄xL蛋白表达及活细胞计数均明显降低，联合应用地塞米松或阿霉素则作用效果更为明显，结果证实Bcl?鄄xL反义寡核苷酸具有细胞毒活性，能够增强化疗药物诱导的白血病细胞死亡。 　　1.3　c?鄄myb 　　c?鄄myb基因属于癌基因的一种，与细胞周期进展有关。c?鄄myb蛋白水平随细胞周期的进程而短暂升高。在细胞终末分化阶段c?鄄myb的表达迅速下降。c?鄄myb的表达能阻断正在分化的骨髓细胞成熟。Luger 等[6]用c?鄄myb的反义寡核苷酸对部分慢性粒细胞白血病病人在自体骨髓移植前进行骨髓净化，提取CD34(+)骨髓细胞，用c?鄄myb的反义寡核苷酸净化24h(19例)或72h(5例)，检测c?鄄myb mRNA发现其表达水平下降大约50%，细胞经长期原代培养，检测bcr/abl发现超过50%的病人取得了完全的净化，第100d细胞遗传学检测发现，尽管自体移植前100%的病人呈Philadelphia染色体阳性，但移植后有6/14的病人有细胞遗传学改变，其中1例获得完全细胞遗传学缓解，3例Philadelphia(+)病人细胞降至33%以下，与对照组相比效果明显。 　　2　凋亡抑制蛋白家族 　　肿瘤的发生发展与细胞的凋亡受阻密切相关，许多凋亡抑制蛋白(IAP)家族成员已成为基因治疗的有效靶点。Survivin是1997年发现的一种新的凋亡抑制基因，定位于17q25上，广泛地表达于胚胎发育组织以及多数人类肿瘤细胞，在正常分化成熟组织中未见表达。Survivin以细胞周期依赖特异性表达于G2/M期