一种新的水母半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因的克隆、表达与性质鉴定.pdfVIP

一种新的水母半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因的 克隆、表达与性质鉴定 杨彦臻，寸树健，彭立胜，谢小瑾，卫剑文，杨文利，徐安龙’ (中山大学生命科学学院生物化学系，国家高技术发展计划海洋生物功能基因组开放实验室， 教育部基因工程重点实验室，广州510275) 列。它的读码框编码131个氨基酸残基的前体蛋白，包括18个氨基酸的信号肽和113个氨基酸的成熟蛋白。氨基酸序列分 析表明，水母半胱氨酸蛋白酶抑制荆CystatinJ与第二类半胱氨酸蛋白酶抑制剂有明显同源性，而且具有典型的功能域及保 守的二级结构。另外，水母半胱氨酸蛋白酶抑制剂CystafinJ还有一些新的特点，例如，高度保守的羧基端疏水残基对Pro— Trp被ser97一Trp8所取代以及在系统进化树上处于一个单独的分支，这都说明水母CystafinJ是半胱氨酸蛋白酶抑制剂家 族的一个全新成员，我们将其归为第四类半胱氨酸蛋白酶抑制剂。进一步构建了pETlr,x—CystatinJ原核表达载体，进行了 J在大肠杆菌中的表达条件，获得了具有良好可溶性的重组蛋白。通过Nf+螯和层析 诱导表达，并摸索了重组Trx—Cystatin