质粒抽提提高产率的方法.docVIP

质粒抽提 求助编辑百科名片?? 细菌质粒 质粒抽提方法即去除 RNA，将质粒与细菌基因组 DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。 　　【如何去除 RNA】 　　去除 RNA 相对比较简单，首先是使用 RNase 消化 (抽提中或者抽提后)。经过 RNase 消化后，RNA 变得比较小了，其残留对酶切反应几乎没有影响。如果要彻底去除残留得 RNA，则需要更烦琐的操作。 　　【如何将质粒与细菌基因组 DNA 分开】 　　基本上是采用两种办法：一是利用酶/弱去污剂部分裂解细菌，在抽提时只让质粒从细菌中释放出来，而不让基因组 DNA 从细菌中出来，从而将质粒和基因组 DNA 分开；二是利用 NaOH/SDS 完全裂解细菌，让质粒和细菌基因组 DNA 都从细菌中出来，再利用质粒和基因组 DNA 在变性/复性过程中的不同表现，将质粒与基因组 DNA 分开。 　　【去除蛋白质及其它杂质】 　　基本上是与去除细菌基因组同时实现的。但是，依据不同的细菌，不同的培养条件，以及操作时的精细程度等，杂质的残留量会不同。所以，通常需要使用苯酚做更进一步的纯化。 　　经过上面的处理，沉淀下来的质粒基本上可以用于酶切了。如果要用于更高级的实验，如转染，则需要做进一步的纯化，如 CsCl 超离心。 　　【实验前方法/试剂的选择】 　　首选方法是碱裂解法。如果有问题，或者是大质粒