能力验证试验中大肠杆菌O157：H7的分离与鉴定.pdfVIP

2412 中国卫生检验杂志2008年 l1月 第 l8卷 第11期 ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology，Nov2008；Vol18 No11 【经验交流】 能力验证试验中大肠杆菌0157：H7的分离与鉴定 林彩华，蔡颖，曾梅锦，杨梓坚，陈冠武 (汕头出入境检验检疫局，广东汕头 515031) [关键词] 能力验证试验；大肠杆菌O157：H7 [中图分类号] 11378．2 1 [文献标识码] C [文章编号】 1004—8685(2008)11—2412—02 大肠杆菌O157：I-I7(EHECO157：H7)属于肠出血性大肠杆 1．3 方法 菌(EnterohemorrhagicE．coli，EHEC)的一个血清型，可引起散发 参照SN／T0973—2000检验标准进行常规方法检测。无 性或爆发性出血性结肠炎、溶血性尿毒综合症，成为新的凶险传 菌操作分别将B057和B320冻干粉溶于25rnlBP肉汤中，混 染病原之一。自1982年被首次确证为一种重要的人类肠道致 匀后分别接种于 225mlBP肉汤 中370(2培养 6h，再转接 m 病菌以来，相继在美国、加拿大、英国、日本及南美某些国家发生 (Ec)n肉汤，41℃培养 24h，然后分别取 5mlm(EC)n肉汤 多次爆发流行。据报道，肠出血性大肠杆菌O157：H7基本上是 在miniVIDAS分析仪上作大肠杆菌O157快速初筛。同时，将 一 种食源性致病菌，52％是动物性食品引起，14％是水果与蔬菜 该增菌液分别划线接种山梨醇麦康凯琼脂和科玛嘉大肠杆菌 引起，12％是水引起，16％是人与人接触引起，因此加强进出口 O157显色平板 ，37℃培养 24h，挑取可疑特征菌落纯培养后， 食品大肠杆菌0157：Iq7的检验工作十分重要。为了提高实验 同时进行传统生化鉴定、API生化鉴定、VITEK生化鉴定、血清 室对病原菌的检验鉴定水平，确保检验结果的准确性，2007年3 学试验。应用本实验室内部方法进行实时荧光 PCR检测，参 月底，汕头局技术中心动检实验室参加了由CNAS组织的肉制 照文献 进行菌液或样 品培养液 的DNA提取。实时荧光 品中大肠杆菌O157：H7检测能力验证试验，本文就能力验证试 PCR反应体系总体积为 20 ，内含 ProbesMaster2xconc 验中大肠杆菌O157：137的分离与鉴定过程及结果进行总结。 10 ，2OIxM上下游引物各 1．0 ，20~mol／L探针 0．5 ， 模板2tzl。反应参数为：预变性95 5min，1个循环；95~C， 1 材料与方法 10s，60~2(，30S(检测荧光信号)，4|D一45个循环。 1．1 样品来源 2份编号分别为B057和B320的能力验证样品由CNAS 2 结果 提供。样品均为含肉粉的冻干粉。 样品B320miniVIDAS初筛结果为大肠杆菌 O157阴性 ； 1．2 材料 B320荧光PCR结果呈阴性；其在山梨醇麦康凯琼脂及大肠杆 检验用培养基和微量生化鉴定管等购 自北京陆桥和广州 菌O157显色平板上均无大肠杆菌O157特征菌落生长。样品 环凯两家公司；科玛嘉大肠杆菌O157显色培养基购 自郑州博 B057miniVIDAS初筛结果为大肠杆菌 O157阳性；B057荧光 赛；大肠杆菌O157单克隆抗体及m 血清购自中国CDC传染 PCR结果呈阳性 ，cP值24．5；其在山梨醇麦康凯琼脂平板上 病所；大肠杆菌 O157：H7菌种购 自中国菌种保藏中心；mini 生长淡褐色中心、扁平透明菌落，在大肠杆菌O157显色平板 VIDAS全 自动免疫分析大肠杆菌 O