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畜牧兽医学报2010，41(6)：692—696
AetaVeterinariaetZootechnicaSinica
荷斯坦奶牛瘤胃微生物脲酶的分离与鉴定
赵圣国1’2，王加启h，刘开朗1 旦h2，于 攀1
，李 萍1，卜登
(1．中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室，北京 100193；
2．甘肃农业大学动物科学技术学院，兰州730070)
摘要：本研究旨在从荷斯坦奶牛瘤胃中分离活性脲酶。从奶牛瘤胃中收集瘤胃内容物，通过离心和超声破碎的
CaptoQ离子交换层析柱纯化脲酶。将纯化后的脲酶用活性PAGE分离，并利用改良的Fishbein染色法，确定脲
相匹配的肽段和蛋白质。结果表明从CFRF和RCP中分离出较高活性的脲酶，但经染色后只有RCP脲酶显示活
链球菌(Streptococcussalivarius)和嗜碱芽孢杆菌(Bacillushalodurans)相似。这说明绕过纯培养微生物，直接从
瘤胃中分离脲酶，来研究其性质和来源是可行的，尤其适合对未培养微生物的研究。
关键词：瘤胃脲酶；分离纯化；活性电泳；LC-MS／MS；蛋白质组
中图分类号：$823．91 文献标识码：A 文章编号：0366-6964(2010)06-0692—05
IsolationandIdentificationofUreasefromtheRumenContentof
HolsteinCowsa
by Culture-independentStrategy
ZHAO Jia-qi¨，LIUKai—lan91，LIDanl”，
Sheng-gu01”，WANG
YU
Pin91，BUDeng-panl
Animal
(1．State AnimalNutrition，InstituteScience，Chinese
KeyLaboratoryof of Academyof
AnimalScienceand
100193，China；2．Collegeof
AgriculturalSciences，BeOing
730070，China)
Technology，GansuAgriculturalUniversity，Lanzhou
isolateureaseactive fromcowrumen．Rumen
Abstract：This wasconductedto
experiment protein
freerumenfluidandruminalcellular
contentswerecollectedfromHolsteinCOWSviafistula．Cell
theaddi—
fluidwerecollected andultrasonication．After
protein
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