基于狂犬病病毒重组蛋白的ELISA检测方法的建立及其初步应用.pdfVIP

基于狂犬病病毒重组蛋白的EL|SA检测方法的建立及其初步应用 程朝飞1群，宫苗苗1撑，王勇1，2，田康乐1，赵占中1，李刚1· (1．中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室，北京100093； 2．中国农业大学动物医学院，北京100193) 摘要：(目的)原核表达狂犬病病毒的基质蛋白(M)，并以此作为包被抗原建立问接ELISA检测方法，与以狂犬病病毒 序列设计特异性引物并引入SmaI和NotI酶切位点，经RT—PCR扩增得到目的基因，连接pCR@2．1载体，构建重组质粒 I和Not pCR—Ry-M，重组质粒用SmaI进行双酶切，酶切产物定向克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中，构建重组表达载体 pGEX—RV．M。将重组表达载体转化E．COli 达量较大且主要以可溶性的形式表达。亲和层析纯化目的蛋白，Westernblot表明融合蛋白具有良好的反应原性，使用纯化 的融合蛋白作为包被抗原建立了问接ELISA方法并检测了95份血清，同时使用带有HiS标签的重组狂犬病病毒磷蛋白P (RV—Hi 的ELISA检测试剂盒相比，使用重组P蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA检测方法具有更高的符合率，能够代替全