体外受精、输卵管移植技术在PS%2fAPP转基因小鼠扩大繁育应用.pdfVIP

全国动物遗传育种及生物技术研讨会 研究报告 体外受精、输卵管移植技术在PS／APP转基因 小鼠扩大繁育中的应用 周生来王惟于洋杨葳吕相川郑志红 (中国医科大学实验动物部， 辽宁省实验动物转基因重点实验室，沈阳110001) 【摘要】目的建立Ps御P转基因小鼠扩人繁育的新方法。方法腹腔注射PMsG．HcG超排三组 用胚胎移植的方法将获得的2．Cdl胚胎移植剑假孕母鼠的输卵管里。比较不同鼠龄的雄性PS／APP 转基冈小鼠体外受精后的受精率、产仔率、Rl性率，并与常规繁育的方法进行比较，评价体外受精 的实验效率。结果不同鼠龄的雄性PS／APP转基冈小鼠在体外受精后的受精率、产仔率、降l性率无 显著性差别(，，0．05)，与常规繁育方法比较筹异显著(P0．05)。结论此研究成功应用体外受精技 术对PS／APP转基因小鼠进行扩人繁育。 【关键词】小鼠精子体外受精阿尔茨海默病扩大繁育 阿尔茨海默病(AlzheimdsdiseaseAD)属丁．神经系统退行性疾病，是导致老年痴呆病的主要原 宫测试中出现记忆力障碍，是研究Alzheimer病的理想模型。由’丁二需求量较大，故本实验利J}}j体外 受精的方法在短时间内对Ps／APP转基因小鼠进行保种及扩大繁育，同时满足了众多阿尔茨海默病 (Alzlleimersdi泐∞AD)研究者对PS／APP转基冈小鼠的科研需求。 1材料与方法 1．1实验动物所有实验用小鼠均在SPF级动物房饲养和繁殖，供体选用本单位饲育的SPF级c57BL／6 自动光控(12h明／12h暗)。 serum 1．2试剂及仪器孕马血清(Pregnant髓re chorionic 绒毛膜促性腺激素(Human Gonadotropin，HcG上海生物化学制药厂)、矿物油、 M16培养液、透明脂酸酶均为Si鲫a生产：HTF培养液购买于日本株式会社。C仅培养箱购白贺 利公司，体视显微镜购臼厦门麦克奥迪公司。 ‘1．3体外受精 1．3．1精子的采集【州：对3月龄、6月龄、12月龄雄性APP转基因小鼠，分别取其附睾尾，沿与曲细 精管垂直方向剪口，用灭菌的解剖针从附睾尾部挑取l滴浓密的精液，放入已预培养的HTF 培养液中。于C02培养箱37℃条件下进行获能培养1．5h，并以血球计数板计数该精子悬浊 液的浓度。 1．3．2超排和取卵同：取6～8周的雌性C57BL／6小鼠90只，分别腹腔注射PMSG5砌／只，间隔48h 后再腹腔注射HCG5砌／只，于腹腔注射HCG14h后取卵。采用颈椎脱位法处死小鼠，剪下 【基金项日】国家自然科学基金辽宁省科学技术计划项目：2006305007．2 【作者介绍】周生来(1982·)，男，研究方向：实验动物转肇因与摹冈敲除。Ema订：商伽sh朋glai@163．c伽 【通讯作者】郑志红，Email：曲ih∞g曲舶g@163．com 142 全国动物遗传育种及生物技术研讨会 l 输卵管放入矿物油中，在输卵管膨大部崩解剖针划破，将卵母细胞团滑入150p HTF培养 液中培养。 1．3．3体外受精：将适量获能后精子分别放入含朱受精卵的培养液中(每滴含未受精卵80～100个)， 使其精子终浓度为200个／IIl，然后放入c02培养箱中受精6h。 1．4受精卵的鉴定体外受精6ll后在实体显微镜下观察受精情况，将有第二极体和双原核的卵判 定为受精卵。计算受精率，次日观察2．cem发育率。 1．5胚胎移植181 1．5．1假孕母鼠的制备：取10周左右的lCR雌性小鼠在移植前一天下午与结扎的雄性小鼠交配，次 日早上观察剑阴道栓的为假孕0．5d的小鼠。 1．5．2 2-cen受精卵的移植：称重假孕母鼠，用l％戊巴比妥纳腹腔注射将其麻醉，酒精消毒后剪背 肾部毛，在髂骨和肾脏下方剪一纵切口，引出卵巢、输卵管、子宫，将输卵