应用分子生物学技术检测枣疯病植原体基因.pdfVIP

应用分子生物学技术检测枣疯病植原体基因 樊颍萍豳建保+手娟杨晓宁 《由疑省农业科学院聚树研究壤，由弧太谷030815) 摘要：植原体(phytoplasmas)．原称类菌原体(Mycoplasmalike 类无细胞肇、不能人jI：培养、存在于植物筛管细胞中的类似植物病原细菌的原核生物，属r 柔膜菌纲。械原体病害-枉世界上广泛分布，经常与一些人宗植物病害的流行有关(例如果树、 林术、牧草等)。由于缺乏细胞肇至今不能体外培养，柯赫氏法!I!U无法对其宜接验址，只能 则嫁接戏昆虫传播的间接方法对其分类。分子生物学的发展，使得槭原体的签定和分类成为 2个 可能。本研究以16SrRNA基冈羽’印基阑．搜计引物，进行赢拨羽I套式PCR检测，以及圳l IO个碱基和1个l 1个碱基的引物进行RAPD分析，对枣疯病植原体加以检测，台分子生物学 水平搂述该病原的特点，以求提赢对枣疯病的理解及控制管理侵染的能力。 关键词：枣疯瘸；植原体：PCR检测；RAPD分祈 枣疯病是枣树的毁灭性传染病害(俗称枣树的癌症，为植物界重大检疫病 害)，每年导致3．5％的枣树死亡，是枣产业可持续发展的头号威胁。以往对该 病害的控制是控制虫媒的传播或通过作用于缺乏细胞壁的四环素之类的抗生索 或其他化学药剂消除病原，但两者对阚删的防治效果并不理想，静者是因为不可 能全部消除圈闻媒介，后者因为其昂贵的费用，并且由于对环境的影响，好多图 家禁止使用抗生素和一些化学防治试剂，更不用说长期使用带来抗药性。因此防 治此病害应需通过使用健康接穗繁殖或找到抗性品种，或至少在抗性可抑制的环 境条件下，抑制病害的爆发。 枣疯病最初描述为～种嫁接性的病窖，透射电子显微镜表明这种病害与植原 体有关。1980年，徐绍华对枣疯病病枝新梢韧皮部组织和病根进行了超簿切片观 察，均发现了植原体的存在，并经过研究进一步证明枣疯病是由植原体感染的。 1984年史春霖等用冰冻断裂枣辫韧皮部组织，在扫描电镜下观察到枣疯病病原植 原体。1985年Bak证明3种荧光素可用于枣疯病病原植原体的检测，其中以DAPI 效果最好，荧光法简便、快速、廉价，其应用可大大提高枣疯病研究的效率。何 ’ 放亭等也应用PCR技术检测甘薯的丛枝病、枣疯病的植原体’。 ’ o 逐逐作者：樊新薄。女。碛t-，助理i湃究英。 33 由于植原体(phytoplasma)严格寄生于植物的韧皮部，不能进行人■：培养， 因而对其遗传本质、生化特性、营养要求的研究都比较缺乏，嗣时其检测和鉴定 技术的发展也受到阻碍。随蔫分子生物学方法在各领域中的广泛应用，PCR技 rRNA是原核生物染色体基 术使植原体检测与分类取得了令入瞩舀的进展。16S 因组中的一种rRNA编码区序列，在进化中高度保守，常作为原核生物系统发育 及分类研究的标准方法。有1000多种植物受到植原体侵染，系统分析 16SrRNA基因表明植原体代表着柔膜萤纲一个属。RFLP分析撩原体属成员的16S rRNA基因，至少可分为15个16SrDNA组lll。这些16Sr代表植原体的不同科一类。 根据难培养细菌的最低分类标准，每一个16SrDNA组的一个代表品系现在划分 为一个候选植原体属名称。16SfRNA基因的高度保守性意味着这个基因无法鉴 定和区分16Sr组的亚组。通过进～步的分析具有多祥性的基因和区段，可区分属 于同一16S tu蹴因和16S／23SrRNA内部基因间隔序列。丽RAPD技术可以在对物种没有任何 分子生物学研究的情况下，对物种的基因组进行DNA片段多态性分析，著结合 其它方法，通过统计分析，确定其在系统演化和分类中的地位；运用上百科，弓f物， 可以对整个基因组进行多态性检测，两个基因组之间的微小差异也能被反映出 来；另外由于RAPD引物大规模生产，大大降低了分子生物学研究的成本。 本研究主要根据16S rRNA基因和rp(菲核糖基