超顺磁性氧化铁标记骨髓间充质干细胞移植治疗兔急性胰腺炎的磁共振活体示踪.pdfVIP

November2013,Vo1．13,No．1l ·1419 · 中国药物与临床 2013年 11月第 l3卷第 11期ChineseRemedies Clinics, — — · 基 础 研 究 · 超顺磁性氧化铁标记骨髓间充质干细胞移植治疗 兔急性胰腺炎的磁共振活体示踪 张瑞平 姜增誉 李健丁 重症急性胰腺炎 (severeacutepancreatitis，SAP)是由各 间层MSCs，加入到含 5ml培养基的无菌离心管中。常温下 种原因引起胰酶被激活，导致胰腺组织 自身消化、水肿、出血 以 1000r／min离心洗涤 l0min，弃去上清，取细胞沉淀。细胞 和坏死的炎症反应 ，常继发感染性腹膜炎 、休克、全身炎症反 沉淀中加入含 20％胎牛血清的L．DMEM培养基 ，调整细胞密 应综合征和多器官功能障碍综合征等严重并发症，预后极 度约 1~106／ml，接种于25cm 细胞培养瓶，在 37℃，体积分 差 [1]。目前的治疗措施主要是对症治疗、支持治疗 、预防胰腺 数为5％CO：，饱和湿度恒温细胞培养箱中培养。48h后更换 感染和坏死 ，疗效仍不佳。近年来，骨髓间充质干细胞 (mes— 培养基 。去除未贴壁细胞，以后视细胞生长情况每 3—5d换 enchymalstemcells．MSCs)移植治疗急性胰腺炎的实验研究 液 1次。待贴壁细胞约90％时，用 0．25％的胰蛋白酶消化，按 认为 MSCs可分化为有功能的胰腺干细胞 ，对损伤的胰腺进 1：2传代后继续培养，用倒置相差显微镜观察细胞形态。取第 行修复。为治疗重症SAP提供了一种新的思路和手段 ，而细 3代细胞 ．分别与一抗 (抗 CD29、CD34、CD44、CD45单克隆 胞移植后在活体内示踪成为随之而来的研究难点。近年来， 抗体)室温反应 30min，PBS液洗涤后重悬细胞 ，1％多聚甲醛 随着超顺磁性氧化铁 (SPIO)纳米颗粒标记细胞技术的成熟， 固定 15min，然后进行流式细胞仪检测。 磁共振成像 (MRI)活体示踪 SPIO标记细胞成为新的研究热 1．4 MSCs的磁标记 ：多聚左旋赖氨酸 (PLL)与 SHO混悬 点=I【]。本实验拟采用SPIO标记兔 MSCs并移植入SAP模型兔 于培养液中 (PLL和SPIO的终浓度分别为 1．5I~g／ml和250 行 MRI扫描．探讨干细胞移植治疗 SAP过程中，MRI活体示 Ixg／m1)，将SPIO．PLL复合物分别以1：4与培养基混合 ，使铁 踪移植干细胞的可行性。 的终浓度为50Ixg／ml，加入到第3代MSCs培养液中进行标 1 材料和方法 记 ，置于37℃、体积分数为5％CO：培养箱中孵育过夜。以未 1．1 实验动物：选 12只体质量600～700g的健康新西兰大 标记细胞作为对照组。 白兔 ，雌雄不拘，由山西医科大学实验动物中心提供。 1．5 建立模型：参照文献[4]建立 SAP模型，将实验兔固定 1．2 主要试剂和设备 ：SPIO纳米颗粒为德国Schering公司 后常规消毒 、铺巾，在无菌条件下，模型兔沿腹门线正中切 口 生产的Resovist：1．4ml／支 ．含铁浓度0．5mmol／ml，铁颗粒直 进腹 ，暴露胰十二指肠及胆总管。找到十二指肠乳头部 ，给予 径(5O±5)nm。德国Siemens公司的1．5TSonataMRI系统。美 丝线缝扎