壳寡糖对烟草花叶病毒的体外钝化作用.pdfVIP

第24卷第1期 病 毒 学 报 V01．24NO．1 2 0 0 CHINESE VIROLOGY 2008 8年1月 JOURNAI。OF January 壳寡糖对烟草花叶病毒的体外钝化作用 商文静1，吴云锋1，商鸿生1，赵小明1、2，杜昱光2 关键词：壳寡糖；烟草花叶病毒；钝化作用 03 中图分类号：$432．4文献标识码：A 文章编号：1000—8721(2008)01—0076 壳寡糖是一种由脱乙酰基几丁质经酶降解后制 枯斑后，记录枯斑数，取平均值，以经处理后半叶枯 备的氨基葡萄糖，它具有多方面的生物活性，在调节 斑数目较对照半叶枯斑数目的降低百分率表示病毒 植物的生理机能、调控植物形态发生、诱导植物抗病 侵染活性的变化。将病毒稀释液以常规负染法制 性、抗逆性以及抑制真菌、细菌的生长发育等方面的 作用多有报道，但关于壳寡糖对植物病毒的抑制作 透射电镜观察病毒粒体，拍照。 用未见报道。在研究利用壳寡糖防治烟草病害时， 在试验所采用的处理浓度范围内，壳寡糖都降 发现壳寡糖不仅可以诱导烟草产生对病毒的系统获 低了枯斑数目。随着壳寡糖浓度的提高，枯斑数目 得抗病性口‘3]，而且还能直接钝化烟草花叶病毒 降低百分率也相应提高。壳寡糖浓度为100pg／mL (Tobaccomosaic 时，平均枯斑降低率超过30％；浓度为300ug／mL virus，TMV)，造成病毒侵染性降 低。本研究拟通过半叶枯斑法和电镜观察方法研究 壳寡糖对TMV的体外钝化作用。 平均枯斑降低率为88．4％，以后随浓度增大其枯斑 降低率没有显著变化。侵染活性检测结果表明，壳 供试壳寡糖i00％质量分数，聚合度(DP)3～ 10，分子量3kD。由中科院大连化学物理研究所糖寡糖处理降低了TMV的侵染性，其对病毒具有一 工程研究室张虎等报道的方法，用脱乙酰基几丁质 定的体外钝化作用。 经酶降解过膜制得。使用前用蒸馏水配制成浓度为 100～1 观察，视野中存在大量典型的TMV粒体(图1A、 000肛g／mL的壳寡糖溶液供试。供试TMV B)，粒体刚直呈杆状，长度300nm左右，仅有不足 为本研究室保存，用前在普通烟(Nicotiana 5％的粒体发生轻度断裂，这是病毒在提纯操作过程 tabacum)上繁殖，按常规方法提纯，经200～300nm 中造成的，属于正常情况。添加低浓度的壳寡糖溶 紫外扫描确定纯度和浓度。JEM一1230型透射电镜 观察TMV粒体，接种枯斑寄主检测TMV的侵染 活性。 电镜观察TMV粒体也未见明显变化。当壳寡糖浓 分别用等体积不同浓度的壳寡糖溶液稀释病 度增加到300弘g／mL以后，经电镜观察，视野中约 80％TMV病毒粒体发生断裂失形，形成多数长度 毒，对照用等体积0．01mol／LPB(pH7．4)缓冲液稀 为50～150nm的粒体片段，多数为短小片段(图 释病毒，使病毒稀释液终浓度为20／-g／mL，并置于 1C、D、E)。