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盐酸克伦特罗检测方法研究进展 时间:2011年10月20日?来源:网络?阅读次数( 19944次)?微博?论坛 　　摘要：盐酸克伦特罗，俗名“瘦肉精”，在动物体内能增强脂解和减慢蛋白质分解代谢，具有调节营养物质的流向和重新分配的作用，在畜牧生产中大剂量使用可明显提高饲料转化率和瘦肉率，但其残留在动物组织中，人食用后会对肝、肾等内脏器官产生毒害，甚至引起死亡，已引起国内外的高度重视。本文就目前国内外检测盐酸克伦特罗的主要方法及进展情况进行综述。 　　关键词：盐酸克伦特罗;瘦肉精;酶免疫分析技术 　　盐酸克伦特罗(clenbuterol，CLB)，俗名“瘦肉精”，化学名为“2-[(叔丁氨基)甲基]-4-氨基-3，5-二氯苯甲醇盐酸盐”，药品名为“克喘素”，是一种β2-肾上腺素能激动剂。20世纪70年代末，美国等发达国家开始了将CLB用作“营养重分配剂”及“促生长剂”的实用性开发研究;80年代被广泛应用到畜禽生产中。CLB在动物体内能增强脂解和减慢蛋白质分解代谢，具有调节营养物质的流向和重新分配的作用，若在畜牧生产中大剂量使用可明显提高饲料转化率和瘦肉率，因而在畜牧行业被俗称为“瘦肉精”。CLB残留在动物组织中，人食用后会对肝、肾等内脏器官产生毒害，出现心悸、头痛、目眩、恶心、呕吐、心率加快、肌肉振颤等症状，严重者甚至死亡。近年来动物性产品中CLB残留对人类健康造成的危害和对生态食物链所造成的破坏已经引起高度的重视。下面就目前国内外检测CLB的主要方法及进展情况作一综述。 　　1　样品的选择 　　CLB在肌肉、肝脏、肺脏、肾脏、眼球的残留量多，残留维持时间较长，但是这些样品预处理过程复杂，难于操作;而CLB在血浆中浓度较低，维持时间短，所以，都不是检测CLB残留的理想样品。但CLB有良好的热稳定性，在体内不会被破坏分解，大量以原形由尿液排出，尿液中CLB的浓度比血浆中高40倍，可实现宰前检测，所以尿液是检测CLB的较好的样品。CLB能特异地与毛发、羽毛中的色素牢固结合，而且残留量大、维持时间长、采集方便，也适合宰前检测，所以毛发、羽毛是检测CLB非法使用最好的样品。因此，建议应用毛样、尿样来检测CLB更为合理和理想。 　　2 样品前处理 　　尿样经4500转/分离心10分钟，取上清液可直接用于检测;但是组织样品检测前必须进行复杂的样品前处理，对组织中残留的CLB加以提取、纯化、浓缩。常规方法主要有4种：液-液萃取法、固相萃取法(SPE)、免疫亲和色谱法(IAC)、基质固相分散法(MSPD)，其中固相萃取法为许多实验室广泛采用，该法可成批处理样品，实现自动化，溶剂用量少，费时少。 　　3　检测方法 　　目前，检测CLB残留的方法主要有四种，即高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱法(CG-MS)、毛细管区带电泳法(CE)和免疫分析技术(IA)。 　　3.1　高效液相色谱法(HPLC) 　　HPLC适合测定热不稳定和强极性的β-激动剂及其代谢产物，而且，HPLC可以与柱前提取、纯化及柱后荧光衍生化反应和质谱(MS)等系统联用，容易实现分析过程的自动化。黄士新等(1995)应用紫外检测器，在λ=243nm，色谱柱：shimpackCLC-ODS150×6.0mn，流速：1mL/min，柱温：室温30℃的条件下检测猪肝脏和猪肉中的CLB残留，最低检测限可达2ng/g[4]。国外有人应用HPLC (二极管阵列检测器)测定动物性食品中CLB残留，测得最低检测限为1.26ng/g，回收率达98.9%[5]。目前，我国已将HPLC法作为检测CLB残留的半确证性方法，最低检测限范围为1～15ng/g，其优点是专属性好、选择性强、检测精确度较高，而且假阳性率低;缺点是样品处理时间长，检测过程烦琐、难于操作，需贵重仪器，在实际应用中受到一定的限制。 　　3.2　气相色谱-质谱法(GC-MS) 　　GC-MS法优点是把色谱高效快速的分离效果和质谱高灵敏度的定性分析有机合起来，能在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析，而且具更高的检测极限。Fente C. A等用GC-MS法检测牛毛中CLB的残留，最低检测限为5ng/g[6];Pteer Batioens应用气相色谱-串联质谱法(GC-MS-MS)对牛、羊、猪组织中的CLB含量进行检测，最低检测限为2ng/g[7];刘琪等用GC-MS法(EI离子源)检测猪尿中的CLB，检测限为0.5ng/mL;VanRhijin等用三甲基硅基或2-二甲基硅基吗啉衍生物检测尿提取物中的CLB，衍生物用电脉冲方式或化学离子化方式扫描，会产生更高的灵敏度。另外，GC-MS法与HPLC法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更低。因此，我国将GC-MS法定为检测CLB的确证性方法(NY/T468~2001)。