胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响.docVIP

实验五胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响 教学目的与要求： 1、观察胰岛素和肾上腺素对家兔血糖浓度的影响。 2、掌握血糖浓度的测定方法。 3、掌握葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的原理和方法。 4、掌握血糖浓度的正常参考值，了解血糖测定的临床意义。 (GOD)和过氧化物酶 (POD) 相偶联发生的偶联反应。 第一步：葡萄糖氧化酶利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。 第二步：过氧化物酶在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原 性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物(苯醌亚胺非那腙)。 二、操作步骤 （一）胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响 1、动物准备：取正常家兔两只，实验前预先饥饿16小时，称体重(—般为2-3kg)。 2、注射激素前取血：—般多从耳缘静脉取血：剪去耳毛，用二甲苯擦拭兔耳，使其血管充血，再用干棉球擦干，于放血部位涂一薄层凡士林，再用粗针头或刀片刺破静脉放血。采用葡萄糖氧化酶—过氧化物酶法时，则将静脉血收集于干净试管中,静置至血清析出。取血完毕，用干棉球压迫血管止血. 3、注射激素：—只兔子注射胰岛素；皮下注射，剂量为0.75U/kg体重。另一只兔子注射肾上腺素：皮下注射，剂量为0.4mg/kg体重。分别记录注射时间。 4、注射激素后取血：方法同上；取血时间：肾上腺素注射后30分钟；胰岛素注射后1小时。从注射胰岛素的兔子取血后，应立即用10ml 250g/L葡萄糖做腹腔内或皮下注射，以防家兔发生胰岛素休克(低血糖休克)。 5、测定血糖：分别测定各血样的糖含量，方法请见实验四“血糖测定”。 6、计算：计算注射胰岛素后血糖降低和注射肾上腺素后血糖增高的百分率： △BS=注射后BS—注射前BS；“+”值表示BS升高；“—”值表示BS降低(BS—血糖)。 （二）葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖 1、取试管3支，按下表操作。 葡萄糖氧化酶法测血糖操作步骤 加入物(ml) 空白管 标准管 测定管 血清 － － 0.01 葡萄糖标准应用液 － 0.01 － 蒸馏水 0.01 － － 酶酚混合试剂 1.5 1.5 1.5 混匀，置37℃水浴中，保温15min，加2ml水混合后在波长505nm处比色，以空白管调零，读取标准管及测定管吸光度。 2、计算： 三、注意事项 （一）胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响 1、剃兔耳毛时，先用水润湿后在剃毛，要求耳缘静脉四周要剃干净，否则取血时易引起溶血； 2、选用腹部皮肤作胰岛素和肾上腺素皮下注射 ，一手轻轻提起腹部皮肤，另一手持注射器以45°进针，针头不要刺入腹腔，更不要穿破皮肤注射到体外。 （二）葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖 1、最后加酶酚混合试剂，各管反应时间应一致； 2、因用血量甚微，操作中应直接加样本至试剂中，再吸试剂反复冲洗吸管，以保证结果可靠； 3、葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量； 4、严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。 四、思考题 葡萄糖氧化酶法不能直接测定尿液葡萄糖含量；而且严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。为什么？ 小 结 葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的线性范围至少可达22.24mmol/L，回收率94%～105%，批内CV为0.7%～2.0%。批间CV为2%左右，日间CV为2%～3%。葡萄糖氧化酶法与己糖激酶法比较，73份标本葡萄糖氧化酶法均值为8.31mmol/L，已糖激酶法均值8.21mmol/L，相关系数为0.9986，回归方程y=1.0026x－2.29。 本法测定葡萄糖非常特异，从原理反应式中可知第一步是特异反应，第二步特异性较差。误差往往发生在反应的第二步。一些还原性物质如尿酸、维生素C、胆红素和谷胱甘肽等，可与色原性物质竞争过氧化氢，从而消耗反应过程中所产生的过氧化氢，产生竞争性抑制，使测定结果偏低。然而，在本法的测定条件下，溶血标本血红蛋白的浓度达10g/L，黄疽标本胆红素浓度达342μmol /L，维生素C小于30mg/L，均不影响测定结果。氟化钠浓度达2g/L不干扰测定结果。标本中含尿素浓度达46.7mmol/L，尿酸浓度达2.95mmol/L，肌酐浓度达4.42mmol/L。半胱氨酸浓度达3.30mmol/L，甘油三酯浓度达5.6mmol/L，胆固醇4.40 mmol/L，对测定结果均无显著影响。 左旋多巴100mg/L，维生素C 5mg/L以上，谷胱甘肽100mg/L时，可引起负误差；半胱氨酸达10mmol/L时，产生相当0.72mmol/L葡萄糖的正误差。 2