调心方对杏仁核注射Aβ大鼠记忆行为和胆碱能系统作用的研究.docVIP

调心方对杏仁核注射Aβ大鼠记忆行为和胆碱能系统作用的研究* 刘学源，徐品初，林水淼，赵伟康 （上海中医药大学老年医学研究所，上海 200032） [摘要] 目的 研究调心方对痴呆大鼠模型的空间学习记忆功能及胆碱能系统的影响。通过单侧杏仁核注射β造成痴呆大鼠模型，采用水迷宫法及放射免疫法观测调心方对痴呆大鼠模型的空间学习记忆能力及胆碱能系统的作用。调心方可显著改善β诱导的大鼠空间学习记忆障碍，提高模型大鼠的活性及受体值。调心方对β诱导的大鼠空间学习记忆障碍及胆碱能系统损害具有显著的治疗作用。 调心方；阿尔茨海默病；痴呆模型；学习记忆；胆碱能系统 [文献标识码] A [文章编号] 1007-5496（2001）05-0048-02  阿尔茨海默病（Alzheimer disease，AD）是发生于老年前期和老年期以记忆力进行性减退并影响生活和社会能力为特征的大脑退行性疾病，是老年期痴呆最常见的类型之一。目前本病的病因、诊断、治疗尚无突破性进展，尤其是治疗，尚缺乏理想的方法和药物。调心方是根据中医益心气、振心阳、豁痰开窍的治疗原则在《千金要方》“开心散”基础上组成的中药复方。临床治疗AD取得了较好疗效[1]，实验研究表明，该方对电解损毁前脑基底核造成痴呆大鼠模型的学习记忆功能，胆碱能系统和肾上腺素能等系统均有明显作用[2]。本文以E2020为对照，观测调心方对单侧杏仁核注射β-淀粉样蛋白（Aβ）造成“痴呆”大鼠模型的空间学习记忆功能及胆碱能系统的影响。为该方的临床应用提供实验依据。 1 对象与方法 1.1 资料 选Sprauge-Dawley（SD）雄性大鼠，清洁级，体重250±30g，购自中国科学院上海实验动物中 心。大鼠单笼饲养，自由摄食与饮水，室温18～20℃，日光辅助照明，维持每日光照12h。随机分为5组：正常对照组、假手术组、类AD模型组、调 心方组、E200组。 1.2 方法 大鼠以2%的异戊巴比妥钠（40mg/100g体重）腹腔麻醉，立体定向仪固定头部，切开皮肤，暴露头骨，于前囟后3.2mm，右侧旁开4.3mm，深度8.5mm进针。A（25-35Sigma公司）每次注射5.0nmol（用0.1%的三氟乙酸溶解），手术对照组注射等量溶剂（0.1%三氟乙酸），注射时平稳进针，6min内注射完毕，留针5min后缓慢退出。 1.3 药物组成及用药 调心方由党参、茯苓、远志、桂枝、菖蒲等中药组成，配成含生药4.67g/ml的水煎剂，备用。以上各组动物于造摸前1周开始给药，每天灌胃1次，连续3周。迷宫训练期间，于训练前30min给药。调心方组用药剂量为23.35（生药）/kg，（依标准动物体重等效剂量法，分别相当于成人每天用量的10倍）。迷宫训练期间，于训练前30min给药，其余各组用等量的双蒸水灌胃。 ·关键提示· ·AD缺乏理想的动物模型和治疗方法，即往的中枢胆碱能神经系统破坏模型，实验性自身免疫性痴呆模型，自然衰老模型等，但这些模型均不能全面反映出AD的病理特征。本文采用新的Aβ单侧杏仁核注射的方法，造成Aβ沉积脑组织大鼠模型，这使本研究结果更为可靠。 ·调心方以党参补气，安神明；以菖蒲、远志、茯苓等化痰浊，通心窍；在临床改善AD患者记忆、智力、认知功能及生活方面有较好效果。 1.4 空间学习记忆力测试 采用Morris水迷宫法[3]。水迷宫由中国科学院上海药物研究所提供，平台设于迷宫东北象限正中，水平面高出平台1.5cm，水温保持在19～20℃大鼠连续训练6d，2次/d，设定最长游动时间为70s，以秒表记时，记录大鼠找到平台所需时间，或称潜伏期。 1.5 胆碱乙酰化转移酶（ChAT）活性测定 采用（1-14C）Ac-CoA掺入法[4]（1-14C）Ac-CoA为Amersham公司产品，比放射性51.0Ci/mmol。 1.6 乙酰胆碱酯酶（AchE）活性测定 采用改良的微量羟胺比色法[5]。 1.7 M-受体结合容量（Rt值）测定 采用3H-QNB受体结合法[6]。3H-QNB：Am -ersham公司产品，比放射性51.0Ci/mmol。 1.8 统计方法 水迷宫数据采用重复测量设计的方差分析，应用6.12统计软件在PC上处理，并用Duncan或SNK进行组间两两比较。 2 结果 2.1 调心方对A（25-35单侧杏仁核注射类AD大鼠空间学习记忆力的影响 随着训练天数的增加，各组平均潜伏期（EL）逐渐缩短。组间比较，与正常组及手术对照组比，模型组EL明显延长，第4天开始有显著差异（P0.05）；与模型组比较，调心方组从第3天开始EL即有显著差异（P0.05），E2020组从第4天开始EL开始有显著差异（P0.05）。而正常组与手术对照组、调心方组及E2020组间均无显著差异（P0.05）。表明调