醛固酮对豚鼠耳蜗离子通道蛋白的早期作用.docVIP

醛固酮对豚鼠耳蜗离子通道蛋白的早期作用作者：李琦　黄德亮????作者单位：1　广州南方医科大学南方医院耳鼻喉科（广州　510515）2　解放军总医院耳鼻咽喉-头颈外科（北京　100853） 【摘要】? 目的　检测醛固酮作用早期豚鼠耳蜗离子通道蛋白基因的表达改变情况。方法　使用RT-PCR方法检测醛固酮腹腔注射后6小时豚鼠耳蜗中Na-K ATP酶β1、β3亚单位及钠离子通道蛋白α 亚单位（ENaC α subunit）基因表达的改变情况。结果　在豚鼠耳蜗中Na-K ATP酶β1、β3亚单位的表达情况无明显改变，钠离子通道蛋白α 亚单位则出现明显上调。结论　醛固酮在豚鼠耳蜗中可能通过基因组作用方式发挥作用。 【关键词】? 醛固酮；　耳蜗；　离子通道蛋白；　逆转录聚合酶链反应（RT-PCR） ????? The pristine effect of aldosterone on ionophorous proteins in ??? guinea pig’s cochlea ??? LI Qi1,? HUANG De-liang2 ??? 1　Department of Otolaryngology, Nanfang Hospital of Nanfang Medical University, Guangzhou 510515, China ??? 2　Department of Otolaryngology, General Hospital of PLA, Beijing 100853, China ??? 　　【Abstract】 Objective　To study the pristine effect of aldosterone on ionophorous proteins in the guinea pig cochlea. Methods　RT-PCR was used to detect the expression of Na-K ATPase and ENaC mRNA in 6 hours after aldosterone injection. Results　At the early stage after aldosterone injection, the expression that of Na-K ATPase β1、 β3? subunit mRNA remained unchanged and that of ENaC α subunit mRNA was up-regulated in the cochlear lateral wall. Conclusion　Aldosterone may produce a marked effect through genome mode in the cochlea. ??? 　　【Key words】　Aldosterone;　Cochlea;　Ionophorous protein;　Reverse transcriptase-polymerase chain reaction（RT-PCR） ??? 　　近年来有研究发现醛固酮腹腔注射可以引起豚鼠耳蜗出现膜迷路积水的改变［1, 2］，目前对于醛固酮在耳蜗中的作用方式及其可能的作用机理仍未得到确切的实验证明。本研究拟通过检测醛固酮腹腔注射后早期（6小时）耳蜗中若干离子通道蛋白基因的表达情况，了解在醛固酮作用早期，耳蜗离子通道蛋白的表达改变，以探索醛固酮在耳蜗中可能的作用机理。 ??? 1　材料与方法 ??? 1.1　实验动物和试剂　10只白色红目豚鼠购自解放军总医院实验动物中心，体质量300 ～ 400 g，雌雄不拘，耳廓反射灵敏，电耳镜检测双侧鼓膜完整。醛固酮购自Sigma公司（Sigma，05521），RT-PCR试剂盒购自Invitrogen公司（Invitrogen，11146-024）。 ??? 1.2　方法 ??? 1.2.1　动物分组及取材：实验动物随机分为两组，每组5只。实验组腹腔注射醛固酮0.1 mg／100 g，对照组腹腔注射生理盐水50 μl。注射后6小时取耳蜗外侧壁组织作为实验材料。 ??? 1.2.2　RT-PCR方法：按试剂说明书进行。 ??? 1.2.2.1　总RNA提取：动物麻醉后快速断头，剥离出双侧颞骨，打开听泡，取出颞骨组织，置入DEPC水配制的PBS溶液中，冰浴下在体视显微镜下分离出耳蜗外侧壁组织。每只豚鼠的双侧耳蜗外侧壁组织作为一个计量单元。取出的组织置入经去RNA酶处理的15 ml离心管，加入1 ml Trizol，冰浴下电动匀浆机匀浆，直至匀浆液成一单一溶液且无可见的固体颗粒。上述匀浆液在室温（15 ～30）下孵育5 min，加入200 μl