大鼠肝癌细胞系CBRH-9301的建立和其特性.pdfVIP

大鼠肝癌细胞系C翁RH-9301的建立及其特性 大鼠肝癌细胞系CBRH．9301的建立及其特性 强家模 董晓摹 肝癌是我国高发恶性肿瘤之一，目前仍未有有效的根治手段。开展肝癌的实验基础研究， 发现新的肝癌特征，对开拓治疗新的领域是有利的。我们曾报道了大鼠移植型肝癌模型的建 立，在此基础上于体外培养建立了一新的大鼠肝癌细胞系，命名为CBRH-9301。有了体内移 体外肝癌的实验基础研究。现把CBRH-9301的建立过程及一些细胞学特性报告如下。 材料与方法 (-。)材料 理鉴定为肝细胞型肝癌，移植于同品系Wistar幼鼠，从而建立AFP阳性的大鼠移植性肝癌模 0a的培养箱内培养，待新生的细胞生长铺满孔时，转入小瓶培养。现已生长稳定，隔4～5d 需传代1次。 《--1染色体制备 96胰酶 h后，用0．3 培养生长旺盛的CBRH-9301细胞，每毫升培养液加1Pg秋水仙素，4 200 mol／L 作用，用吸管轻轻冲散细胞，经1 r／rain，离心5min，弃上清液，沉淀细胞用0．075 KCl于37℃水浴箱中低渗处理1h，然后用新鲜配制的固定剂，甲醇：冰醋酸(3：1)固定10 200 min，离心1 r／min，5min，弃上清液，沉淀的细胞加固定剂固定，重复3次。最后加固定剂 至合适的细胞密度滴于洗净的载片上，室温下自然干燥备用。由此获得的染色体制片，用 Giemsa染色，经水洗再经二甲苯透明，中性树胶封片，用显微镜的油镜照相，从放大照相做染 色体计数与分析。 (三)电镜观察的准备与方法 埋，醋酸铀、柠檬酸钼双重染色，用JEM-100B型透射电镜作超微结构观察。 2．扫描电镜准备与方法培养的CBRH．9301细胞，用戊二醛、锇酸双固法固定，经临界干 燥，然后喷金．最后用HITACHIS_450型扫描电镜观察。 作者单位：200032上海．中国科学院上海细胞生物学研究所 中国癌症研究进展@ 结 果 (一)细胞形态的观察 例增大，核仁显著。在光镜下可见多层重叠生长，经常有些重叠生长细胞呈球状。有时此类球 状物会脱落，漂浮于培养液中，可漂移到另一处生长。这种细胞生长特点，可能对研究肿瘤细 胞的转移有所启示，亦可能提供研究肿瘤细胞转移有用的材料。 呈圆泡状。微绒毛长短不一，高倍放大下，CBRH-9301细胞似一毛刺状果实。 晰，呈凹凸不同形状，形成不定型的异形核，细胞质内粗面内质网数量显著减少，并失去正常平 行的排列结构。经常可见粗面内质网呈不同程度的扩张，形成大小不等的“泡”或“池”。线粒 体数显著减少，并失去正常结构，大部分线粒体扩大，嵴减少。嵴的排列亦失去与长轴垂直的 正常结构。细胞质内含有丰富的核糖体，主要以多聚核糖体形式存在。呈梅花状排列，有些核 糖体附着于内质网，有些游离于细胞质中，细胞表面膜有微绒毛。绒毛基部与细胞质相通。 (二)染色体观察 9301大鼠肝癌细胞系在建系第10代的细胞进行染色体观察和计数。．共计数120个细胞的染 属正常范围。核型分析表明，虽然染色体众数仍属正常范围，但其核型组成已发生变化，仍未 见异常染色体和标记染色体。 讨 论 验基础研究。体外培养的细胞具有可开展外源基因导人细胞，研究基因治疗肿瘤及药物筛选 等有利材料。可用于研究分析肿瘤遗传学的变化。现今该系细胞染色体观察表明，染色体众数 为42条，属正常范围，但核型分析已显示其核型组成已发生变化。但仍未见异常染色体和标记 染色体。近年来，一些学者观察诱癌过程中染色体的变化，发现在大鼠癌变过程中，染色体出 现很大的不稳定性，某些染色体或染色体的一些区段增多或丢失，显示出在大鼠癌变过程中有 “基因”数量的变化。某