亚栖热菌透性化细胞的耦合固定化研究.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７，２７（１１）：３２～３６ 亚栖热菌透性化细胞的耦合固定化研究  张　峻 　陈　颖　陈晓云　齐　欣　魏雪生 （天津市园艺工程研究所　天津　３００３８４） 摘要　将海藻酸盐凝胶包埋法与交联法和聚电解质静电自组装覆膜法相耦合，对含有海藻糖合 酶活性的亚栖热菌的透性化细胞进行了固定化研究。结果表明，利用重氮树脂和聚苯乙烯磺酸 钠对海藻酸凝胶微球交替覆膜，可以显著提高凝胶微球在磷酸盐缓冲液中的稳定性，以碳二亚胺 对固定化细胞进行交联处理则可以提高固定化细胞中海藻糖合酶的热稳定性。透性化细胞经包 埋－交联－覆膜耦合固定化后，酶活回收率为３２％，最适酶反应ｐＨ值由６．５左右升至７．０左右， 最适反应温度未变，仍为６０℃。所得固定化细胞间歇反应时，催化麦芽糖转化为海藻糖的转化率 可达６０％，重复使用４次（每次５０℃、反应２４ｈ），酶活损失小于２０％，转化率可保持在５０％以上。 关键词　亚栖热菌　海藻糖合酶　耦合固定化 中图分类号　Ｑ８１４．２ 　　海藻糖是由两个葡萄糖分子以 １，１糖苷键连接 该透性化细胞进行了固定化，提高了酶的利用率，但同 α? 而成的非还原性双糖，广泛存在于低等植物、藻类、细 时也发现所制备的固定化细胞凝胶颗粒在磷酸盐缓冲 菌、真菌、酵母及昆虫中，对生物膜和生物大分子具有 液中稳定性不高。为了解决该问题，本文将海藻酸盐 良好的非特异性保护作用，在医药、生物技术、食品、化 包埋法与聚电解质静电自组装覆膜法及交联法相耦 妆品、农业等领域拥有广阔的应用前景［１，２］。目前海 合，对含有海藻糖合酶活性的透性化细胞进行了固定 藻糖的制备方法主要有两种，一种是利用麦芽寡糖基 化研究。 海藻糖合成酶和麦芽寡糖基海藻糖水解酶的协同作 １　材料与方法 用，以淀粉为底物生产海藻糖，该法已经用于工业化生 产，因需两种酶制剂协同使用，通常称为双酶法［３］。另 １．１　试　剂 一种方法是利用海藻糖合酶，即麦芽糖 Ｄ葡萄糖基 ?α?? 　　碳二亚胺（ＥＤＣ），上海延长生化科技发展有限公 变位酶（ＥＣ５．４．９９．１６），催化麦芽糖发生分子内转糖 ６ 司；聚苯乙烯磺酸钠（ＰＳＳ），分子量 １×１０，Ａｌｄｒｉｃｈ公 苷反应，生成海藻糖，该法只需一种酶制剂，通常称为 司；重氮树脂（ＤＡＲ），按文献［６］制备。 ［３］ 单酶法 。与双酶法相比，单酶法操作比较简单，可以 １．２　菌　株 充分利用现有成熟的麦芽糖生产技术和设备，近年来 　　亚栖热菌ＣＢＳ０１菌株：本实验室分离。 ? 受到人们的关注。 １．３　摇瓶产酶培养基（ｇ／Ｌ） 　　海藻糖合酶来源于微生物，目前已报道的产酶菌 　　多蛋白胨５，酵母膏 １，ＮａＮＯ ０．７，ＮａＨＰＯ ０．１， ３ ２ ４ 株有水生栖热菌、嗜热栖热菌、恶臭假单胞菌、脂肪杆 ＭｇＳＯ ·７ＨＯ０．２，Ｃ